真细菌种属鉴定 PCR Mix 2100 次实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
真细菌种属鉴定 PCR Mix 2100 次实验步骤按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

C18H16N2O=276.33
〖级别〗：BS 
生物染色试验：合格 
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：棕红色发光针状结晶或粉末。溶于乙迷(橙色)、挥发油、苯、浓硫酸、脂肪和油，微溶于乙醇，不溶于水、碱溶液和弱酸。〖熔点〗(冰乙酸结晶) 166℃。zui大吸收波长 493(420)nm。有刺激性
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗〖保存〗：RT
苏丹B
〖英文名称〗：Sudan black B；Fat black HB；Solvent black3；C.I.26150  
〖其他名称〗：苏旦B；溶剂3；油溶BT；脂肪HB；2,3-二氢-2,2-二甲基-6-[[4-(苯基偶氮)-1-萘]偶氮]萘嵌间二氮杂苯；脂肪BN 
〖CAS号〗：4197-25-5 
C29H24N6=456.55
〖级别〗：BS
生物染色试验：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：蓝色结晶性粉末。溶于丙同和甲苯，微溶于乙醇，几乎不溶于水。〖熔点〗 126℃。zui大吸收波长 598(415)nm。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)生物染色剂，细菌、脂肪染色用，组织化学中用于区分石蜡和动物脂肪，髓素染色，白细胞颗粒和高尔基氏器染色，细胞和组织中类脂质的染色
〖保存〗：RT

T7 DNA 聚合酶 ( 未修饰 )    小鼠抗 T7 标签单抗
Poly(U) 聚合酶    小鼠抗 T7 标签单抗
Taq DNA 连接酶    小鼠抗 Tag-100 标签蛋白单抗
T4 RNA 连接酶 1    小鼠抗 Trx 标签蛋白单抗 
9° N DNA 连接酶    小鼠抗 Trx 标签蛋白单抗 
核酸外切酶 T    小鼠抗 V5 标签单抗
Lambda 核酸外切酶    小鼠抗 V5 标签单抗
RecJf 核酸外切酶    小鼠抗 VSV-G 标签单抗
T7 核酸外切酶