胚胎裂解液1mL原理产品介绍：

胚胎裂解液1mL原理产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

〖保存〗：RT
钙黄绿素二钠盐
〖英文名称〗：Calcein disodium salt；Bis[N,N-di(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein disodium salt, Fluorescein-bismethyliminodiacetic acid disodium salt
〖其他名称〗：钙黄绿素钠盐
〖CAS号〗：108750-13-6
C30H24N2Na2O13=666.50
〖级别〗：BS〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：橙色或棕色粉末或晶体，溶于水
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
铬T
〖英文名称〗：Eriochrome black T；1-(1-Hydroxy-2-naphthylazo)-6-nitro-2-naphthol-4-sulfonic acid sodium salt；C.I.Mordant black II；C.I. 14645 
〖其他名称〗：依来铬T；羊毛铬T；媒介T；酸性媒介T；1-(1-羟基-2-萘偶氮)-6-硝基-2-萘酚-4-磺酸钠 
〖CAS号〗：1787-61-7 
C20H12N3NaO7S=461.38 
〖级别〗：IND

PLPD 固定液    超快转染试剂盒
Methacarn 固定液    高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒
PFG 固定液    钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL
对苯醌固定液    *抑制剂溶液，20mg/mL
ECD-G 固定液    细胞核微量制备试剂盒
细胞周期与凋亡检测试剂盒（PI 法）    干粉型 LB 培养基
Zamboni 固定液    银染清除剂
考马斯亮蓝 R-250 染液    鲑鱼精 DNA 溶液
DB3.1 感受态细胞    重蒸酚
SYBR Green II 核酸染料    酸酚
态细胞    Oligo dT12-18 引物，0.5μg/μL
    电泳溴酚蓝溶液