真菌种属鉴定 PCR Mix 7100 次实验方法产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
真菌种属鉴定 PCR Mix 7100 次实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

〖英文名称〗：Bisbenzimide H 33342 trihydrochloride；HOE 33342；Hoechst 33342
〖其他名称〗：赫斯特荧光燃料33342；荧光染料H33342；双苯并咪唑H33342三盐酸盐 
〖CAS号〗：23491-52-3
C27H28N6O ? 3HCl ? xH2O=561.93 (anhydrous basis)
〖级别〗：BioChemika
〖含量〗：≥98% (HPLC)
溶解性：Clear to very slightly hazy yellow to brown solution at 50mg plus 1ml of water
水分：≤16.1% (6moles/mole)
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：黄色或黄绿色粉末，溶于水
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)细胞遗传学研究的常用试剂，荧光染色细胞的DNA ，插入DNA的A-T区,具有低的细胞毒性,形成膜渗透性荧光DNA链
〖保存〗：-20℃
荧光素
〖英文名称〗：Fluorescein；Diresorcinolphthalein；Dihydroxyfluorane；Tetraoxyphthalophenonean hydride；C.I. 45350 
〖其他名称〗：荧光红；荧光黄；荧光橙红；酸性黄73；萤光素；萤光红；萤光黄；2-(6-羟基-3-氧代-3H-呫吨-9-基)苯甲酸；荧光橙；萤光橙黄；荧光酯

*糖基化酶抑制剂    星形细胞生长因子
Afu * -DNA 糖基化酶    胸腺嘧啶
人类单链选择性单功能* -DNA 糖基化酶    胸腺嘧啶核苷
DNA 促旋酶 (E.coli)    溴酚蓝
GpC 甲基转移酶 (M.CviPI)    溴化乙锭 (EB)
热敏磷酸酶    溴化乙锭干粉 (EB)
无机焦磷酸酶，热稳定    溴化乙锭清除剂
无机焦磷酸酶 ( 酵母 )    溴化乙锭溶液 ,10 mg/mL
三磷酸腺苷双磷酸酶    溴甲酚绿
ATP 硫酸化酶    溴甲酚紫
RecA 蛋白    雪旺细胞生长因子
RecA 蛋白    血清白蛋白清除剂
Tth RecA 蛋白    血液 DNAout
帽结构类似物