GTP 溶液,2.5mM2mL实验方法
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GTP 溶液,2.5mM2mL实验方法

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2017-01-19 15:58:52
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产品简介

GTP 溶液,2.5mM2mL实验方法运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

GTP 溶液,2.5mM2mL实验方法产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
GTP 溶液,2.5mM2mL实验方法产品介绍:

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

邻苯二酚紫
〖英文名称〗:Pyrocatechol violet;Catecholsulfonphthalein;Pyrocatecholsulfonephthalein;Catechol violet 
〖其他名称〗:儿茶酚紫;邻苯二酚磺酞;焦儿茶酚紫;儿茶酚磺酞;二茶酚紫;邻二酚磺酞
〖CAS号〗:115-41-3
C19H14O7S=386.38
〖级别〗:IND
溶解试验:合格
〖干燥失重〗:≤0.5%
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计):≤0.1%
PH变色域 :5.2(黄)~6.8(紫)
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:红棕色结晶粉末,有金属光泽。易溶于水和乙醇,微溶于无水乙醇,不溶于非极性溶剂(如醚、苯、二甲苯)。其水溶液呈黄色,当〖酸度〗增加时则由黄变红,pH6以上溶液变为紫色,pH9以上变为红紫色
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)络合指示剂。滴定铋、镉、钴、铜、〖铁〗、镓、铟、镁、〖铅〗、锰、〖镍〗、钍、〖锌〗。用于铋、硼、铬(III)、铜、铌、锑、锡、锆、钍的光度测定。纸色谱的喷显剂
〖保存〗:RT
比布里希猩红
〖英文名称〗:Acid red 66;Biebrich scarlet WS; Ponceau BS;C.I. 26905;Biebrich Scarlet;Sodium 6-(2-hydroxynaphthylazo)-3,4'-azodibenzenesulfonate

10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装 )    玻璃匀浆器 ,10mL
HinfI     3'-RACE 试剂盒
10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装长尖 )    5'-RACE 试剂盒
KpnI    沉淀型 TMB 显色试剂盒
10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌 )    DNA  CTAB 溶液,20%
Mlu    柱式粪便 RNAout
10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌长尖 )    柱式软体动物 DNAout
MboI    柱式水样 DNAout
10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌带芯 )    柱式软体 RNAout
NcoI    通用型 RT-LAMP 试剂盒
5.2,3M 
1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 袋装 )    DNA  Tris HCl,1M,pH6.5

 

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