杂交袋20 个说明书磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

杂交袋20 个说明书使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
产品介绍：

磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。

HB101 化学感受态细胞    0.1mL×10    1，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷
JM109 化学感受态细胞    0.1mL×10    *
SURE 化学感受态细胞    0.1mL×10    碘乙酸
TG1 化学感受态细胞    0.1mL×10    *
*0 化学感受态细胞    0.1mL×10    秋水仙素
XL1-Blue 化学感受态细胞    0.1mL×10    交联琼脂糖凝胶 2B
BL21(DE3) 化学感受态细胞    0.1mL×10    丙烯葡聚糖凝胶 S-100 HR
BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞    0.1mL×10    丙烯葡聚糖凝胶 S-200 HR
Origami(DE3) 感受态细胞    0.1mL×10    丙烯葡聚糖凝胶 S-300 HR
Origami B(DE3)plysS 感受态细胞     0.1mL×10    丙烯葡聚糖凝胶 S-400 HR
Rosetta(DE3) 感受态细胞    0.1mL×10    丙烯葡聚糖凝胶 S-500 HR
Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞    0.1mL×10    QAE 葡聚糖凝胶 A-25

胆钙骨化醇，英文名或英文缩写：VD3，级别：IND，规格：1克
GENEPAGEPLUS4%EZSQZ.*CLDPAK* 4% GENE-PAGE PLUS,挤压式瓶装生物技术级10X75MLCOLD
异烟酰，英文名或英文缩写：INAH，级别：AR，99.5%，规格：5克
PHENOL,BUFFER-SATURATED1PHASE饱和酚,单相生物技术级100MLCOLD
吐混40，英文名或英文缩写：Tween 40，级别：高纯，98%，规格：1克
BLUE-BANDITPROTEINSTAIN蛋白质电泳染色剂生物技术级250MLRT
二甲基脲，英文名或英文缩写：1,3-Dimethylurea，级别：CP，98%，规格：250克
METHYLCELLULOSE,4,000CENTIPOISES甲基纤维素高纯级250G9004-67-5RT
组学级4L