4× 核酸液相杂交液10mL图片产品介绍：

4× 核酸液相杂交液10mL图片使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
4× 核酸液相杂交液10mL图片磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
4× 核酸液相杂交液10mL图片磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

明胶溶液，2%，PCR     1.5mL    硫酸*
高 GC DNA 清除剂，PCR     1.5mL    碘化丙啶苯
MnCl2溶液，25mM，PCR     5mL    活性蓝 19
甲酰胺，PCR     5mL    马来酸钠
MgSO4溶液，10mM，PCR     5mL    硼氢化氰钠
石蜡油，PCR     10mL    乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺
DMSO，PCR     1.5mL    多聚 -L- 赖氨酸 (15-30 万 )
海藻糖溶液，1.5M，PCR     1.5mL    多聚 -L- 赖氨酸 (3-7 万 )
甜菜碱溶液，5M，PCR     1.5mL    多聚 -L- 赖氨酸 (7-15 万 )
绿如蓝染料，PCR     0.1mL    D- 果糖 -6- 磷酸二钠
绿如蓝染料，PCR     1mL    *抑制剂
dNTP 溶液 ,10mM    0.5mL    Nα- 苯甲酰*乙酯
dNTP 溶液 ,10mM    5mL    二甲苯青
dNTP 溶液，2.5mM    0.5mL    叠氮钠
dNTP 溶液，2.5mM    5mL    聚蔗糖 400
dNTP 溶液，100mM     0.5mL    L- * ( 氧化型 )
dNTP 溶液，100mM     5mL    L-(+) 乳酸锂盐
dUTP 溶液，100mM     0.4mL    α- 氰基 -4- 羟基肉桂酸
dITP 溶液，2.5mM    2mL    天狼猩红

4× 核酸液相杂交液10mL图片L-PROLINEL-*美国药典级白色至米白色粉末RTsigma
Hypoxanthine6-羟基嘌呤100毫克USP级，900mcg/mg
NUCLEASELIMINATOR™去除核酸酶纸巾生物技术级RTsigma
H-Pro-OBzl•HClL-*苄酯盐酸盐5克特纯，98.0%
HISTOCHOICE®MB(MOLECULARBIOLOGY)TISSUEFIXATIVE,1X分子生物学组织固定剂组织学级无色至微黄无混浊液体RTsigma
Histaminedihydrochloride组胺双盐酸盐1克BR，99%
AGAROSESFR™超高分辨率琼脂糖生物技术级白色精细粉末RTsigma
Heptanoicacid葡萄花酸1克BR，97%
IPTGULTRAPUREIPTG超纯级白色结晶粉末FROZENsigma
Gumtragacanthpowder西黄蓍胶粉5克GR，99.5%
inol，