DNA 包被溶液100mL实验步骤使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
DNA 包被溶液100mL实验步骤产品介绍：

磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

PCR Mix 染料    10mL    多聚甲醛
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制剂    0.3mL    α- 酮戊二酸钠
Taq 酶抗体    250U    四盐酸精胺
Taq 酶抗体    1000U    5-  -5’- 脱氧尿苷
DNA 修复混合液     30 次    潮霉素 B
DNA 修复混合液     150 次    埃文斯蓝
即用型 PCR 试剂盒 2.0     1 mL    对硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷
即用型 PCR 试剂盒 2.0     9 mL    L- *盐酸盐
探针标记 PCR Mix     0.5mL    腺嘌呤硫酸盐
即用型 PCR 试剂盒 3.0    1 mL    酸性品红
即用型 PCR 试剂盒 3.0    9 mL    α- 酮戊二酸
即用型热启动 PCR 试剂盒    1.5mL    苯甲基磺酰
免 DNA 提取 PCR 试剂盒    100 次    异硫氰酸荧光素
即用型易错 PCR 试剂盒    100 次    亚精胺三盐酸盐

Ethyllaurate十二酸乙酯100克AR，99%
A.C.E.™BUFFER10X,TINTEDA.C.E. 测序缓冲液 (10X 带颜色)测序级淡粉色无混浊液体RTsigma
EosinYfreeacidalcoholsoluble伊红Y(醇溶)1毫升BR，98%
TRISBUFFEREDSALINE(TBS)TAETSTBS片超纯级白色圆片RTsigma
Econazolenitrate氯苯咪唑100uBR
ACETONITRILE乙腈ACS级透明无色液体RT不sigma
D-TheronineD-α-氨基-β-羟基丁酸5克BR，99%
SODIUMDODECYLSULFATE十二烷基钠蛋白组学级白色至米白色精细粉末RTsigma
D-PhenylalaninolD(+)-2-氨基-3-苯基-1-丙醇25克BR，98%
ACRYLAMIDE丙烯酰胺蛋白组学级白色结晶RTsigma
DNaseII5克BR，20-40u/mg，杏仁
β-巯基乙醇蛋白组学级透明无色液体RT不sigma
D-LysineHCLD-氢氯赖氨酸5克BR，99%
缩写：L-P