微量单链 DNA 定量试剂盒1mL实验步骤磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

微量单链 DNA 定量试剂盒1mL实验步骤使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
产品介绍：

磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。

去离子甲酰胺    100mL    新生霉素
BLOTTO 溶液    100mL    L- *
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )    1.5mL    β-D- 阿糖胞苷
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )    1.5mL    8- 羟基喹啉
Denhardt 溶液，50×    100mL    细胞松弛素 B
Denhardt 溶液，50×    100mL    铵 T
鲑鱼精 DNA 溶液    1mL    N ,N- 双 (2- 羟乙基 ) *
鲱鱼精 DNA 溶液    1mL    D- 葡萄糖 -1- 磷酸二钠
小牛胸腺 DNA 溶液    1mL    伊红 Y, 醇溶性
荧光尺    1个    十二烷基硫酸钠
硫酸葡聚糖    1g    乙酸－ 2 －萘脂
聚乙二醇    100g    硫酸铁
酪蛋白    50g    丁酸钠
脱脂奶粉 ( 杂交 )    50g    氯化血红素
即用型封堵液 (NC )     50mL    N-2- 羟乙基 -N’-3- 丙磺酸
即用型封堵液 (Nylon )    50mL    焦碳酸二乙酯
硝酸纤维素膜，13×20cm    1张    二磷酸腺苷二钠

Phenosafranine酚藏红花5克高纯，70%
MOPSMOPS超纯级白色精细结晶粉末RTsigma
Pepsin(porcinestomachmucose)胃液素100克生物技术级，300u/mg
FERRICCHLORIDEHEXAHYDRATE氯化铁,六水ACS级黄橙色大固体块COLD不sigma
PBS(Phosphatebuffersaline)powderedPBS嶙酸盐缓冲液25克AR，99%
HEMATOXYLIN苏木精高纯级浅棕色粉末RTsigma
Oxytetracyclinehydrochloride盐酸地霉素250毫克BR，95%
BIS-TRISBis-Tris超纯级白色结晶粉末RTsigma
OPA邻苯二醛25克BR,50%，分子量1800-2000，液体
TRITON®X-114曲拉通 X-114试剂级透明粘稠液体RTsigma
o-Cresolphthaleincomplexon酞紫500毫克ACS，50%
TTC2,3,5-氯化三苯基四氮唑试剂级白色至米白色至淡黄色结晶粉末C-DYEsigma
Norfloxacin氟呱酸100KU混合体，95%
O-NITROPHENYL-β-D-GALACTOPYRANOSIDE(oNPG)邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷超纯级白色至米白色精细结晶粉末FROZENsigma
Nickeloxa