Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤
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Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤

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2017-01-17 16:27:53
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产品简介

Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液: 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5~10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
7. 离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注:通过第 5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要 *将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时,请在第
8 步之后进行。
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤产品介绍:

Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤磷酸化反应标记:
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂:TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量离心管中制备下列反应液: 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//(25:24:1),充分混匀。
5. 离心,取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui终浓度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
9. 离心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤磷酸化反应(前反应):
1. 在微量离心管中制备下列反应液:


2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记:
当掺入水平很低的时候,需要使用本步骤,即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好,它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5~10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

30%葡萄糖溶液(PH6.5±0.5)250g用于嗜渗酵母检验时的样品稀释(GB标准)
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Todd-Hewitt 肉汤 250(g) incubation media Todd-Hewitt 肉汤 250(g)
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0.性美蓝染色液5ml*6支/盒用于酵母菌镜检染色。
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YPDAMedium
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伊格尔培养基 SMEM 10升 细胞培养用
半固体动力培养基250用于动力观察,菌种保存,H抗原位相变异试验等(SN标准)incubationmedia半固体动力培养基250用于动力观察,菌种保存,H抗原位相变异试验等(SN标准)
TestMedium

Cy3-dCTP 溶液,10mM25μL实验步骤C21H18O5S=382.43
〖级别〗:IND 
PH变色域:pH 1.2(红)~2.8(黄); pH 7.4(黄)~9.0(红紫) 
乙醇溶解试验:合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:棕绿色细小结晶性粉末。易溶于乙醇、甲醇、冰乙酸和碱溶液,在乙酸中呈黄色溶液,稀碱液和氨水中呈红紫色,微溶于水,不溶于乙迷、苯、氯方、四录化碳和乙酸乙酯。zui大吸收波长 579(371)nm
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)酸碱指示剂
〖保存〗:RT
二苯胺磺酸钠
〖英文名称〗:Diphenylaminesulfonic acid sodium salt;Sodium diphenylamine-4-sulfonate
〖其他名称〗:二苯胺-4-磺酸钠;4-(苯氨基)苯磺酸单钠盐;4-二苯胺磺酸钠;二苯胺对磺酸钠;二苯基氨基-4-磺酸钠
〖CAS号〗:

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