dNTP 溶液 ( 标记 )0.5mL实验步骤产品介绍：

dNTP 溶液 ( 标记 )0.5mL实验步骤使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
dNTP 溶液 ( 标记 )0.5mL实验步骤磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
dNTP 溶液 ( 标记 )0.5mL实验步骤磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)250g用于霉菌,酵母菌计数
卫矛醇半固体琼脂 10(g) incubation media 卫矛醇半固体琼脂 10(g)
西蒙氏枸橼酸盐发酵管 西蒙氏枸橼酸盐发酵管 20支 BR
Fraser培养基250用于李氏菌的增菌培养(MERCK标准)incubationmediaFraser培养基250用于李氏菌的增菌培养(MERCK标准)
DNA酶甲基绿琼脂基础 100 用于弯曲杆菌的DNA酶水解试验(GB标准)
PotatoDextroseAgar
GN增菌液 250(g) incubation media GN增菌液 250(g)
蛋白胨水(*肉汤)发酵管 蛋白胨水(*肉汤)发酵管 20支 BR
Fraser添加剂5ml*2支添加到HB4用于李氏菌的选择性增菌培养incubationmediaFraser添加剂5ml*2支添加到HB4用于李氏菌的选择性增菌培养
DnaseAgarBasewithMethylGreen
马铃薯琼脂培养基250g用于霉菌的鉴定培养
GN增菌液 1000(g) incubation media GN增菌液 1000(g)
无盐胰胨水发酵管 无盐胰胨水发酵管 20支 BR
UVM培养基250用于李氏菌的增菌培养(MERCK标准)incubationmediaUVM培养基250用于李氏菌的增菌培养(MERCK标准)
布氏琼脂 250g 用于弯曲杆菌的抗生素敏感性试验和纯化培养。
PotatoAgarMedium
木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐培养基(XLD) 250(g) incubation media 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐培养基(XLD) 250(g)
3% NaC1胰胨水发酵管 3% NaC1胰胨水发酵管 20支 BR
UVM添加剂*加到HB4用于李氏菌的选择性增菌培养incubationmediaUVM添加剂*加到HB4用于李氏菌的选择性增菌培养
BrucellaAgar
马铃薯葡萄糖水250g用于椰毒假单胞酵米面亚种和真菌的增菌培养
40%尿素水 5mL/支×10(g) incubation media 40%尿素水 5mL/支×10(g)
7% NaC1胰胨水发酵管 7% NaC1胰胨水发酵管 20支 BR
LM-250用于膜滤法单增李氏菌选择性分离(NEOGEN标准)incubationmediaLM-250用于膜滤法单增李氏菌选择性分离(NEOGEN标准)
马尿酸钠培养基 250g 用于弯曲杆菌的马尿酸钠水解试验(GB标准)

dNTP 溶液 ( 标记 )0.5mL实验步骤〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：黄色至黄绿色结晶粉末。溶于甲醇、乙醇、乙二醇，微溶于水，其溶液呈略带紫的蓝色荧光
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)适用于以闪光灯、氮分子、氩离子、YAG-TH grass、-THX-eCl等为泵浦光源的可调谐染料激光器。是一种激光转化率较高、稳定性好的激光染料，属蓝绿波段。荧光标记试剂，用于痕量检测酶。
〖保存〗：2～8℃
香豆素
〖英文名称〗：Coumarin；1,2-Benzopyrone；5,6-Benzo-2-pyrone；cis-o-Coumarinic acid lactone；Coumarinic anhydride；Tonka bean camphor
〖其他名称〗：香豆内酯；1,2-苯并哌哢；氧杂萘邻酮；邻氧萘酮；苯并邻氧芑酮；1,2-苯并吡喃酮；2H-1-苯并吡喃-2-酮 
〖CAS号〗：91-64-5 
C9H6O2=146.14 
-Benzylide