DNA 5’末端标记试剂盒10 次实验方法产品介绍：

DNA 5’末端标记试剂盒10 次实验方法使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
DNA 5’末端标记试剂盒10 次实验方法磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
DNA 5’末端标记试剂盒10 次实验方法磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

PotatoDextroseWater
WS琼脂 250(g) incubation media WS琼脂 250(g)
10% NaC1胰胨水发酵管 10% NaC1胰胨水发酵管 20支 BR
啤酒检验系列incubationmedia啤酒检验系列
波尔顿选择性增菌肉汤 250g 用于弯曲杆菌选择性增菌培养
综合马铃薯培养基250g用于真菌的分离培养
葡萄糖铵培养基 250(g) incubation media 葡萄糖铵培养基 250(g)
山梨酸发酵管 山梨酸发酵管 20支 BR
MRS琼脂基础250用于食品中乳酸菌总数测定incubationmediaMRS琼脂基础250用于食品中乳酸菌总数测定
BoltonSelectiveEnrichmentbroth
IntergratedPotatoMedium
葡萄糖半固体培养基 250(g) incubation media 葡萄糖半固体培养基 250(g)
木糖发酵管 木糖发酵管 20支 BR
UBA培养基250用于啤酒中厌氧菌检测incubationmediaUBA培养基250用于啤酒中厌氧菌检测
CCDA基础 250g 用于弯曲杆菌分离培养(WHO方法)
沙氏葡萄糖肉汤(SDB)250g用于霉菌和酵母菌的增菌培养
动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU) 250(g) incubation media 动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU) 250(g)
鼠李糖发酵管 鼠李糖发酵管 20支 BR
NBB培养基250用于啤酒中厌氧菌检测incubationmediaNBB培养基250用于啤酒中厌氧菌检测
CCDABase
SabouraudDextroseBroth
SIM培养基 250(g) incubation media SIM培养基 250(g)
棉子糖发酵管 棉子糖发酵管 20支 BR
Raka-Ray培养基250用于啤酒中乳酸菌检测和分离培养incubationmediaRaka-Ray培养基250用于啤酒中乳酸菌检测和分离培养
CCDA添加剂 2ml*5支 每支添加于200mlCCDA基础中

DNA 5’末端标记试剂盒10 次实验方法〖级别〗：AR
〖含量〗：≥98.0%
〖熔点〗：68～70℃
乙醇溶解试验：合格
〖灼烧残渣〗：≤0.1%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：无色斜方或长方晶体或粉末。有香荚兰豆香，有灼烧味，味苦。溶于乙醇、乙迷、氯方、挥发油和氢氧化碱溶液中，微溶于沸水。〖相对密度〗(d204)0.935。〖熔点〗68～70℃。沸点297～299℃。闪点162℃。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)荧光指示剂。
〖保存〗：RT，避光
酸性偶氮红
〖英文名称〗：Azophloxine；Acid Red 1；Disodium 5-acetylamino-4-hydroxy-3-(phenylazo)naphthalene-2,7-disulphonate
〖其他名称〗：偶氮荧光桃红；偶氮焰红；酸性红1；食品红10；5-(乙酰基氨基)-4-羟基-3(苯基偶氮)-2,7-萘二磺酸二钠盐；酸性红G；酸性大红G；偶氮萤光桃红；8-乙酰氨基-2-苯偶氮基-1-萘酚基-3,6-二磺酸二钠盐
〖CAS号〗：3734-67-6 
C18H13N3Na2O8S2=509.42
reen；4,4′