填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次实验步骤产品介绍：

填入法 DNA 末端标记试剂盒 A5次实验步骤使用方法: 
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交换反应缓冲液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 灭菌的超纯水 补足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端约等于 0.17 μg 的长 100 bp 的双链 DNA。
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5～10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
7. 离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注：通过第 5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要 *将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时，请在第
8 步之后进行。
磷酸化反应标记：
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量离心管中制备下列反应液： 成分 加入的体积 自备的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小肠碱性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 灭菌的超纯水 补足到 150 μL
3. 50℃反应 30 分钟。
4. 加入 150 μL 的 TE 饱和酚//（25：24：1），充分混匀。
5. 离心，取上层（水层）移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui终浓度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置 30～60 分钟。
9. 离心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反应（前反应）：
1. 在微量离心管中制备下列反应液：

2. 37℃反应 30 分钟。
3. 下面的操作与交换反应的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的标记：
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试 剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱（需另购）对于去除未掺入 的 dNTPs 效果很好，它还能大幅减少小于 20 个碱基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的双链 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加热 5～10 分钟以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于 10 个 碱基的寡核苷酸。

酪蛋白葡萄糖肉汤250g用于霉菌、酵母菌等的增菌培养
SBG磺胺增菌液 250(g) incubation media SBG磺胺增菌液 250(g)
3.5% NaC1蔗糖发酵管 3.5% NaC1蔗糖发酵管 20支 BR
抗生素检定培养基H)250用于磺苄*效价测定incubationmedia抗生素检定培养基H)250用于磺苄*效价测定
1%马尿酸钠溶液 0.4ml/支*20支 用于空肠弯曲菌马尿酸钠水解试验
Sabouraud-dextroseBroth
改良MSRV培养基 250(g) incubation media 改良MSRV培养基 250(g)
*发酵管 *发酵管 20支 BR
抗生素检定培养基2号(高PH)250用于*，*等效价测定incubationmedia抗生素检定培养基2号(高PH)250用于*，*等效价测定
Bolton肉汤添加剂 1ml*5支 用于添加到HB0273-1中
大豆胨酵母浸粉琼脂(PYE)250g用于真菌的选择性分离培养
BPL琼脂 250(g) incubation media BPL琼脂 250(g)
1% NaC1*发酵管 1% NaC1*发酵管 20支 BR
玫瑰红钠琼脂250用于霉菌、酵母菌计数incubationmedia玫瑰红钠琼脂250用于霉菌、酵母菌计数
BoltomBrothAdditrive
PhytoneYeastExtractAgar
BPLS琼脂 250(g) incubation media BPLS琼脂 250(g)
3% NaC1*发酵管 3% NaC1*发酵管 20支 BR
普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2)250分离培养霍乱弧菌，*检定用incubationmedia普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2)250分离培养霍乱弧菌，*检定用
菌素纸片(30ug/片) 10片/瓶 用于空肠弯曲菌药敏试验。
营养盐琼脂250g用于检测纺织品的抗真菌活性
改良BPLS琼脂 250(g) incubation media 改良BPLS琼脂 250(g)
3.5% NaC1*发酵管 3.5% NaC1*发酵管 20支 BR
*高盐琼脂250用于*的选择性分离培养incubationmedia*高盐琼脂250用于*的选择性分离培养
Cephalosporinstrip
Nutrient-saltsAgar
XLT4琼脂 250(g) incubation media XLT4琼脂 250(g)
1% NaC1纤维二糖发酵管 1% NaC1纤维二糖发酵管 20支 BR
抗生素检定培养基4号250用于*等的效价测定incubationmedia抗生素检定培养基4号250用于*等的效价测定
萘啶酮酸纸片(30ug/片) 10片 用于空肠弯曲菌药敏试验。
ker 琼脂基础 1000(g) incubation media Baird-Parker 琼脂基础 1000(g)
*脱羧酶肉汤发酵管 *脱羧酶肉汤发酵管 20支 BR
真菌琼脂培养基250用于无菌生长试验incubationmedia真菌琼脂培养基250用于无菌生长试验
TTC(氮蓝四唑) 10g 添加于TTC琼脂基础中

〖CAS号〗：603-48-5    
C25H31N3=373.53
〖级别〗：BR
〖含量〗：≥99.0%
〖熔点〗：175～180℃
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：白色至灰白色或淡紫色粉末。溶于甲醇（C=0.01g/L in 0.1N HC1 in methanol）。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)使用前，在P2O5干燥器中干燥48小时以上，以除去水分。使用时应注意防护，避免吸入或与皮肤接触。产品开封后，应尽快恢复密封状态，在规定条件下〖保存〗
〖保存〗：RT，避光
隐色孔雀石绿
〖英文名