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商品介绍:
测定意义
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。
测定原理:
未添加激活剂时,GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
GPa糖原磷酸化酶a检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/96样 | FS-01S63862 |
产品内容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 1.9mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
注意事项:
1、公司产品仅用于科研操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。
下列是公司正在热销的产品:
小鼠结肠癌抗原(CCA)试剂盒Human IFABP/FABP2(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit浓缩2复合亚基D3抗体
小鼠集落激因子2受体α(CSF2Ra)试剂盒Human IL-35(Interleukin 35) ELISA Kit磷化分裂周期蛋白6抗体
小鼠I型胶原(COL1)试剂盒Human IFN-α(Interferon Alpha) ELISA Kit磷化周期依赖激2抗体
小鼠双肾上腺皮质样激1(DCLK1)试剂盒Human INHB(Inhibin B) ELISA Kit碳酐12抗体
小鼠粒集落激因子受体(GCSFR)试剂盒Human IgA1(Immunoglobulin A1) ELISA Kit泛载体蛋白R2抗体
小鼠磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC3)试剂盒 Human IGF2BP3(Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3) ELISA Kit粘附分子3抗体
小鼠补体1抑制物(C1INH)试剂盒 Human INSL5(Insulin Like Protein 5) ELISA Kit整合相关蛋白CD47
小鼠补体蛋白3(C3)试剂盒Human IgA2(Immumoglobulin A2) ELISA Kit磷化角蛋白8抗体
小鼠补体蛋白4(C4)试剂盒Human IGFALS(Insulin Like Growth Factor Binding Protein, Acid Labile Subunit) ELISA Kit钙结合蛋白D28K抗体
小鼠补体组分1Q受体1(C1qR1)试剂盒Human IGF2R(Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit磷化接头蛋白CrkL抗体
小鼠补体组分5(C5)试剂盒Human HSF2(Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit磷化接头蛋白CrkL抗体
小鼠补体因子B(CFB)试剂盒Human HSP-70(Heat Shock Protein 70) ELISA Kit促肾上腺皮质释放受体1抗体
小鼠补体因子D(CFD)试剂盒Human HSPG(Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit磷化丝切蛋白抗体
小鼠补体因子H(CFH)试剂盒Human HSPβ6/HSP-20(Heat Shock Protein Beta 6) ELISA Kit皮层肌动蛋白抗体
小鼠补体成分3a(C3a)试剂盒Human HYOU1(Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit促肾上腺皮质释放受体2抗体
GPa糖原磷酸化酶a检测试剂盒微量法香叶 98%钨 99.95%,0.1mm 直径Anti-CDK7/Cyclin H/MAT1 /FITC 荧光标记周期依赖性激7抗体IgG
2-庚酮 98%钨 9.95%,50μm Anti-CDK8/FITC 荧光标记周期依赖性激8抗体IgG
2-庚酮 分析标准品,≥99.8% (GC)钨 99.95%,12μmAnti-CDK9/FITC 荧光标记周期依赖性激9抗体IgG
2-庚酮 ≥98%, FCC, Kosher, FG钨粉 9.95%,<1.1μmAnti-Phospho-CDK9 (Thr186) /FITC 荧光标记兔抗人、大、小鼠磷化周期依赖性激9抗体IgG
羟基香草 98%钨丝 99.95%,1mm 直径Anti-CD133/RBITC 红色荧光罗丹明 (RBITC)标记兔抗人、大、小鼠和果蝇CD133抗体IgG
羟基香草 98%,FCC钨标准溶液 1000μg/mlAnti-CD46/RBITC 红色荧光罗丹明(RBITC)标记CD46膜辅蛋白抗体IgG
α-己基肉桂 92%钨 3.5≤d<5.0,99.95%Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 /FITC 荧光标记周期蛋白依赖激抑制因子1C抗体IgG
吲哚 99%钨 99.95%,0.5mm 直径Anti-Phospho-p57 Kip2 (Thr310)/FITC 荧光标记磷化周期蛋白依赖激抑制因子1C抗体IgG