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商品介绍:
NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。
测定原理:
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH;NADPH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT),通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
NADKNAD激酶检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/48样 | FS-01S63212 |
产品内容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 1.9mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
注意事项:
1、公司产品仅用于科研操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。
下列是公司正在热销的产品:
心钠肽(ANP)酶联免疫试剂盒阿彼斯姆素(R)-(-)-3--2-丁 98%, ee 97%2,3-戊二 98%
心钠肽(ANP)酶联免疫试剂盒阿多尼弗林(S)-(+)-3--2-丁 98+%, ee 99%六氟锆 45%水溶液
IL-17 检测试剂盒阿卡2-氨苯 99%乙酰 98%
IL-17 检测试剂盒阿马DL-3-氨丁 97%芹菜素 97%
原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒 阿朴-12'-番茄红素脱落(合成) 99%扁桃苷 分析标准品,>98%
原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒 阿奇DL-氨酰-DL-氨 97%5-氨乙酰盐盐 99%
白介素2受体(IL-2R)检测试剂盒 阿魏亲合素 12 U/mg 芦荟大黄素 95%
白介素2受体(IL-2R)检测试剂盒 阿魏钠1-萘-5-磺 90%氧化苦参 分析标准品
皮肤T虏获趋化因子(CTACK/CCL27)检测试剂盒阿魏松柏酯抗坏血 分析标准品氧化苦参 98%
皮肤T虏获趋化因子(CTACK/CCL27)检测试剂盒阿魏乙酯抗坏血 ≥99.9998% (metals basis)黄芩素 98%
原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒 艾黄素苯 99.7%,无水级盐小檗 98%
原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒 安格洛甙C柠檬铋铵 99%黄 90%
白介素2受体(IL-2R)检测试剂盒 安石榴甙乙酰苯 99.95%,升华纯化隐丹参 98%
白介素2受体(IL-2R)检测试剂盒 安五酯素对氨偶氮苯 分析标准品秋水仙 98%
皮肤T虏获趋化因子(CTACK/CCL27)检测试剂盒奥瑞布林偶氮荧光桃红 Dye content 90 %金雀花 98%
皮肤T虏获趋化因子(CTACK/CCL27)检测试剂盒澳茄新全反式-β-阿林胡萝卜 96%虫草素 98%
NADKNAD激酶检测试剂盒微量法大鼠高密度脂蛋白龙血素A(标准品)Human
植物维生B12龙芽楤木(标准品)Human
人淋巴因子龙眼肉(标准品)Human
兔转化生长因子β2漏芦(祁州漏芦)(标准品)Human, Mouse, Rat
兔一氧化氮合成酶芦丁/芸香叶苷(标准品)Human
大鼠孕受体芦根(标准品)Human
人胸腺活化调节趋化因子芦荟(好望角芦荟)(标准品)Human, Mouse, Rat
小鼠血管紧张素转化酶芦荟大黄素(标准品)Human, Mouse
植物维生A芦荟苷(标准品)Human