二胺氧化酶检测试剂盒微量法活性说明书

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

测定原理：

DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在 460nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率， 计算 DAO 活性。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

二胺氧化酶检测试剂盒试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 0.25mL×1 支，4℃保存。

试剂二：液体 2mL×1 管，4℃保存。

试剂三：液体 1mL×1 管，4℃保存。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

二胺氧化酶检测试剂盒测定操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 460nm，蒸馏水调零。

2、操作表