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中性、碱性土壤速效磷试剂盒-分光光度法注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分,包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷,土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
测定原理
用弱碱性提取碱溶性磷和吸附态磷,用钼锑抗比色法测定。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、震荡仪。
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-分光光度法试剂组成和配制
提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 6mL×1 支,4℃保存。
试剂二: 粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水溶解。用不完的试剂 4℃保存。
试剂三: 粉剂×3 支,4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水溶解。现配现用。
样本处理
新鲜土样风干,过 30-50 目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议称取约 0.05g 土样,加入 1mL 提取液),振荡提取 1h,10000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-分光光度法测定操作表
1、 显色液的配制(可测 20 个样):取 2mL EP 管一支,加入 1320μL 试剂一,再加入 200μL 试剂二,充分混匀后,再加入 480μL 试剂三,充分混匀待用;配好的显色液应为黄色, 若变蓝则为磷污染;显色液必须现配现用;若一次性测不了 20 个样,可按比例缩小各试剂体积。
2、 操作表
空白管 | 测定管 | |
样本(μL) | 200 | |
提取液(μL) | 200 | |
显色液(μL) | 100 | 100 |
H2O(μL) | 700 | 700 |
充分混匀,25℃静置 30min | ||
于 1mL 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 660nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。 |
计算公式
标准曲线:y = 0.1164x-0.012,R2 = 0.9958,x 为标准品浓度(mg/L),y 为吸光值。速效磷含量(mg/kg 干重)=(△A+0.012)÷ 0.1164×V 样÷(W×V 样÷V 样总)
= 8.591×(△A+0.012)÷W
V 样:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量, 约 0.05g
中性、碱性土壤速效磷试剂盒-分光光度法注意事项
1.配好的显色液当天用完,变蓝则不能使用。
2.最/低检出限为 0.2μg/mL。