一、 样品准备
 

　　1. 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞(1至5 X 106细胞)
 

　　2. 小心加入xx毫升GENMED清理液（Reagent A），覆盖生长表面
 

　　3. 小心抽去清理液
 

　　4. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意：可以使用胰l酶消化)
 

　　5. 加入xx毫升GENMED清理液（Reagent A），混匀细胞
 

　　6. 移入到预冷的15毫升锥形离心管(注意：悬浮细胞从这一步骤开始)
 

　　7. 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
 

　　8. 小心抽去上清液
 

　　9. 加入xx微升GENMED裂解液（Reagent B），充分混匀
 

　　10. 转移到预冷的1.5毫升离心管
 

　　11. 强力涡旋震荡15秒
 

　　12. 置于冰槽里孵育30分钟
 

　　13. 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g(或13000RPM，例如eppendorf 5415)
 

　　14. 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
 

　　15. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1)
 

　　16. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
 

　　二、 测定准备
 

　　1. 开启并设定好分光光度仪(温度为25℃)：波长340nm，间隔60秒，读数5次(共5分钟)，并置零
 

　　2. 从-20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；GENMED底物液（Reagent E）避免光照；GENMED缓冲液（Reagent C）置于室温下均衡温度
 

　　三、 背景对照测定
 

　　1. 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
 

　　2. 加入xx微升GENMED反应液（Reagent D）
 

　　3. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
 

　　4. 在25℃温度下孵育3分钟
 

　　5. 加入xx微升GENMED阴性液（Reagent F）
 

　　6. 上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内)
 

　　7. 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照(5分钟读数-0分钟读数)
 

　　四、 样品总活性测定
 

　　1。 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
 

　　2. 加入xx微升GENMED反应液（Reagent D）
 

　　3. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
 

　　4. 在25℃温度下孵育3分钟
 

　　5. 加入20微升待测样品(或50微克蛋白)(注意：样品须清澈)
 

　　6. 上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内)
 

　　7. 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数(5分钟读数-0分钟读数)
 

　　五、 样品非特异活性测定
 

　　1. 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
 

　　2. 加入xx微升GENMED专性液（ReagentG）
 

　　3. 加入20微升待测样品(或50微克蛋白)(注意：样品须清澈)
 

　　4. 上下倾倒数次，混匀
 

　　5. 在25℃温度下孵育10分钟
 

　　6. 加入xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）
 

　　7. 加入xx微升GENMED反应液（Reagent D）
 

　　8. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
 

　　9. 上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内)
 

　　10. 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数(5分钟读数-0分钟读数)