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土壤全硼试剂盒注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硼是植物生长发育必需的七种微量营养元素之一,土壤中硼素的含量高低直接影响着植物的生长状况。
测定原理
硼与甲亚胺在弱酸条件下形成棕黄色配合物,在 420nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、马弗炉、微量石英比色皿/96 孔板。
土壤全硼试剂盒试剂组成和配制
提取剂:粉剂×1 瓶,4℃保存。
提取液:液体 100mL×4 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 8mL 水溶解,加 0.125mL 乙酸。试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
样本处理
新鲜土样风干,过 100 目筛,按照土壤质量(g):提取 剂质量(g)为 1:4 的比例(建议称取约 0.1g 土样,加入 0.4g 提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中,边加边搅拌均匀,然后在马弗炉中 550℃熔融 10min,然后在 920℃熔融 30min,趁热取出坩埚,将熔融物转入烧杯,边搅拌边加 4mL 提取液,必要时加盖,防止溶液溅出,溶解 30min 后,5000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
土壤全硼试剂盒测定操作表
空白管 | 测定管 | |
样本(μL) | 40 | |
试剂一(μL) | 80 | 80 |
试剂二(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 40 |
充分混匀,25℃黑暗中静置 1h | ||
于微量石英比色皿/96 孔板,蒸馏水调零,测定 420nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白 管和A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管 |
计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y = 0.3897x - 0.2359,R² = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.3897×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
= 51.32×(△A+0.2359)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1949x - 0.2359,R² = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.1949×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
=102.64×(△A+0.2359)÷W
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提
取液体积,4mL,W:样本质量,g
土壤全硼试剂盒注意事项
1.配制好的试剂二 4℃保存不可超过 7 天。
2.显色时严格控制温度并且避光,以免显色剂见光分解。