双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次原理产品介绍：

双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次原理产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次原理合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次原理按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

〖保存〗：RT
日落黄
〖英文名称〗：Sunset Yellow FCF；Food Yellow 3；C.I. 15985；FD&C Yellow No. 6；Disodium 6-hydroxy-5-[(4-sulphonatophenyl)azo]naphthalene-2-sulphonate
〖其他名称〗：日落黄FCF；1-对磺酸苯基偶氮-2-羟基萘-6-磺酸二钠盐；食用黄色6号；食品黄3；食用桔黄
〖CAS号〗：2783-94-0
C16H10N2Na2O7S2=452.37
〖级别〗：AR
〖含量〗：≥87.0%
干燥减量、〖氯化物〗及〖硫酸盐〗总量：≤13.0%
水中不溶物：≤0.2 %
〖砷〗：≤3ppm
〖铅〗：≤10ppm
汞：≤1ppm
镉：≤1ppm
〖鉴别〗方法：
1.本品0.1g溶于100ml水中，呈黄色澄清溶液。
2.本品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使动物纤维着色。
3.100ml含有0.001g本品的0.02mol/L乙酸铵溶液，其zui大吸收波长为482±2nm。
4.取本品水溶液做纸上层析，其主色点的Rf值应与标准样品相同。

双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次原理dNTP 溶液，2.5mM    柱式内毒素清除剂
dNTP 溶液 ,10mM    无内毒素水
dNTP 溶液 ,10mM    无内毒素枪头，1 mL
dNTP 溶液，100mM     凝胶法内毒素半定量试剂盒
dNTP 溶液，100mM     RNA 溶解液
超快核酸电泳液干粉     海藻糖溶液，1.5M，PCR 
超快核酸电泳液干粉     无内毒素枪头，200 μL
氨苄*干粉    磁珠血液 DNAout
*干粉    磁珠植物 DNAout
加 A 试剂盒    JM110 感受态细胞
,50mg/mL