单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法
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单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法

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2017-01-19 15:08:19
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产品简介

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法产品介绍:

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

纸上层析条件:
展开剂:正丁醇:无水乙醇:氨水(1%)=6:2:3
温度:20~25℃
试液浓度:0.1g/100ml
试液用量:0.002ml
展开剂前沿上升限度:150mmm
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:橙红色均匀粉末或颗粒,无臭。易溶于水(6.9%,0℃)、甘油、丙二醇,微溶于乙醇、不溶于油脂。水溶液呈黄橙色。在柠檬酸、酒石酸中稳定,还原时褪色。0.1%水溶液呈橙黄色。耐光性,耐热性,耐酸性非常强,耐碱性尚好,但遇碱呈红褐色。
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
丽丝胺罗丹明B
〖英文名称〗:Lissamine rhodamine B ;Sulforhodamine B;Lissamine rhodamine B200;Lissamine rhodamin;Acid rhodamine B;Xylene red B;Acid Red 52;Sulforhodamine B monosodium salt
〖其他名称〗:酸性罗丹明B;酸性红52;二甲苯红B;丽丝胺玫瑰红B;里斯沙明玫瑰红B200;李斯曼罗丹明B;李斯曼若丹明B;丽丝胺碱性蕊香红B200;酸性玫瑰红B;酸性桃红B;柴林红B;磺化罗丹明B;奇通红S;硫罗丹明B
〖CAS号〗:3520-42-1
C27H29N2NaO7S2=580.65

单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次实验方法加 T 试剂盒    一站式磁珠法动物 mRNAout
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柱式 DNA 胶回收试剂盒    氨基磁珠
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硫酸*干粉    环氧基磁珠
非酶多糖清除剂 (RNA )    醛基磁珠
柱式质粒 DNAout    基磁珠 
柱式质粒 DNAout    壳聚糖磁珠
氨苄*溶液 ,50mg/mL    链霉亲和素磁珠
*溶液 ,25mg/mL    蛋白磷酸酶抑制剂混合液 2
硫酸*溶液 

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