两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次实验步骤按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次实验步骤产品介绍：

两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次实验步骤产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖级别〗：BS
生物染色试验：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：褐色或绿色至棕色至紫色或栗色粉末，溶于水。荧光为桔红色。性质稳定，可*〖保存〗。zui大吸收波长570nm，zui大发射波长为600nm。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)应用于荧光染色技术
〖保存〗：RT
酚番红花红
〖英文名称〗：Phenosafranine；Safranine B extra；3,7-Diamino-5-phenylphenazinium chloride；C.I. 50200
〖其他名称〗：酚藏红花；酚藏花红；3,7-二氨基-5-苯基吩嗪翁〖氯化物〗；奎诺二甲基酯
〖CAS号〗：81-93-6
C18H15C1N4=322.79
〖级别〗：IND
〖熔点〗：≥300℃
PH变色域：0.3（红）～1.0（蓝）
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：绿色或棕红色具光泽针状结晶。易溶于水，溶于乙醇，其水溶液和乙醇溶液为紫红色并呈现绿黄色荧光。zui大吸收波长 约530nm。有刺激性。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)生物染色。吸附指示剂，测定〖氯化物〗和溴化物。生化研究用氧化还原指示剂。
〖保存〗：RT
磺酰罗丹明B

两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次实验步骤*溶液 ,50mg/mL    哺乳动物蛋白酶抑制剂
*溶液 ,50mg/mL    植物蛋白酶抑制剂
*干粉    酵母蛋白酶抑制剂
硫酸*干粉    His 标签蛋白蛋白酶抑制剂
真菌 DNAout    组织培养基蛋白酶抑制剂
真菌 RNAout    EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白
真菌 RNAout    木瓜蛋白酶抑制剂溶液，0.5 mg/mL
柱式血液 DNAout    抗*Ⅲ，10mg/mL
柱式血液 DNAout    APMSF 溶液，10mg/mL
RNase-free EDTA 溶液 ,0.5M,pH 8.0    抑氨肽酶，5mg/mL
RNase A 溶液，2mg/mL    钙蛋白酶抑制剂Ⅰ溶液，10mg/mL
RNase-free 75% 乙醇    二氯异香豆素溶液，10mg/mL
超快非醇核酸沉淀剂    E-64 蛋白酶抑制剂，20mg/mL
超快非醇核酸沉淀剂    水蛭素溶液，2mg/mL
 标签单抗