10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法
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10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法

10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法

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2017-01-19 15:02:34
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产品简介

10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)生物染色。指示剂
〖保存〗:RT
普鲁士蓝
〖英文名称〗:Prussian Blue;Ferric ferrocyanide;Ferric hexacyanoferrate(II);Chinese blue;Milori blue;Steel blue;Pigment blue 27;Hamburg blue;Berlin blue;Mineral blue
〖其他名称〗:六合〖铁〗(II)酸〖铁〗;普鲁士兰;中国蓝;贡蓝;〖铁〗蓝;矿蓝;柏林蓝;亚〖铁〗化〖铁〗;华蓝;密罗里蓝;深蓝
〖CAS号〗:14038-43-8
Fe4[Fe(CN)6]3=859.23
〖级别〗:BS
生物染色试验:合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:深蓝色粉末或块状。250℃失去全部水分而部分分解。几乎不溶于水、稀酸及有机溶剂。新制成品可溶于草酸溶液。通常为含有一些〖水份〗和一些碱金属的亚〖铁〗化物。〖相对密度〗 1.80。
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)细菌血清检验中制备中国蓝琼脂培养基时作指示剂(配100毫升溶液用1克)。生物标本着色。气体中除去硫化氢。
〖保存〗:RT
2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(二乙氨基)*
〖英文名称〗:5-Br-PADAP;Bromo-PADAP;2-(4-Diethylamino-2-hydroxyphenylazo)-5-bromopyridine
〖其他名称〗:2-(4-乙氨基-2-羟基苯偶氮)-5-溴吡啶;(5-溴-2-吡啶)偶氮-5-(二乙氨基)*;溴代2-吡啶基-二乙氨基*
〖CAS号〗:14337-53-2 

10nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验方法细菌 DNAout    小鼠抗 Flag 标签单抗
细菌 DNAout    小鼠抗 c-Myc 标签单抗
柱式腐殖酸清除剂    小鼠抗 c-Myc 标签单抗
柱式腐殖酸清除剂    小鼠抗 HA 标签单抗
柱式细菌 DNAout    小鼠抗 HA 标签单抗
柱式细菌 DNAout( 含* )    小鼠抗 GST 标签单抗
可保种型蓝白 T 载体    小鼠抗 GST 标签单抗
PCR 抑制物清除剂    小鼠抗 V5 标签单抗
中草药 DNAout    小鼠抗 V5 标签单抗
中草药 DNAout    小鼠抗 MBP 标签单抗
一步式细菌 DNAout    小鼠抗 MBP 标签单抗
柱式无内毒素质粒 DNAout    小鼠抗 GFP 标签单抗
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制剂    小鼠抗 GFP 标签单抗
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.0    小鼠抗 mCherry 标签单抗
RNase-free T

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