6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤
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6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤

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2017-01-19 15:01:38
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产品简介

6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

C15H17BrN4O=349.23
〖级别〗:AR
〖含量〗:≥80.0% 
铀灵敏性实验:合格 
乙醇溶解实验:合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:暗橙红色结晶或粉末。能溶于乙醇、丙同和乙酸,不溶于水。
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)显色剂,光度法测定Cd,〖镍〗Ni等。 
〖保存〗:RT
4-羟基偶氮苯
〖英文名称〗:4-Phenylazophenol;4-Hydroxy-azo-benzene; Solvent yellow 7;C.I. 11800
〖其他名称〗:对羟基偶氮苯;对苯偶氮酚;4-苯基偶氮*;溶剂黄7;4-N-苯基苯酰胺
〖CAS号〗:1689-82-3

6nt 随机引物,0.5μg/μL5μg实验步骤一站式 RNA 电泳套装    小鼠 RFP 标签单抗
MMLV 逆转录酶    小鼠 RFP 标签单抗
MMLV 逆转录酶    小鼠抗 VSV-G 标签单抗
cDNA *链合成试剂盒    小鼠抗 T7 标签单抗
cDNA *链合成试剂盒    小鼠抗 T7 标签单抗
质粒(载体)列表    小鼠抗 CBP 标签单抗
质粒 ( 载体 ) 系列产品    小鼠抗 HSV 标签单抗
非冻型血液 DNA 保存液    小鼠抗 E2 标签单抗
非冻型血液 DNA 保存液    小鼠抗 S1 标签单抗
硅胶膜离心吸附柱系列 ( 小提 )    小鼠抗 Tag-100 标签蛋白单抗
非酶 RNA 清除剂 2.0    小鼠抗 HPC4 标签蛋白单抗
电泳耐热型 SYBR 染料    小鼠抗 SUMO 标签蛋白单抗
    核酸内切酶 VIII

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