一管式双链 cDNA 合成试剂盒10 次原理合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
一管式双链 cDNA 合成试剂盒10 次原理按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品介绍：

产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖保存〗：RT
〖锌〗试剂
〖英文名称〗：Zincon；2-Carboxy-2′-hydroxy-5′-sulfoformazylbenzene；1-(2′-Hydroxy-5′-sulfophenyl)-3-phenyl-5-(2″-carboxyphenyl)formazan；5-(o-Carboxyphenyl)-1-(2-hydroxy-5-sulfophenyl)-3-phenyl formazan
〖其他名称〗： 5-(2-羧基苯基)-1-(2-羟基-5-磺基苯基)-3-苯基甲单钠盐；2-羧基-2′-氢基-5′-磺苯甲酸单钠盐；邻[2-（2-羟基-5-磺基苯偶氮）亚苄基]肼基苯甲酸单钠盐；〖锌〗单钠盐
〖CAS号〗：62625-22-3或56484-13-0
C20H15N4NaO6S=462.41
〖级别〗：AR
对〖锌〗灵敏度试验：合格
碱溶解试验：合格
络合试验：合格
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计)：≤20.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：紫棕色结晶性粉末。溶于乙醇和碱，溶于氢氧呈红色，不溶于水。遇〖锌〗生成蓝色化合物，稀时为溶液，浓时为深蓝色沉淀。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)比色法测定〖锌〗和铜。直接测定〖锌〗的络合指示剂，并可测定铜和汞。作为络合指示剂间接滴定钙、〖锌〗、铜、〖镍〗、钴、〖铁〗、锰、镉、〖铅〗、铈和铟
〖保存〗：RT
磷钨酸
〖英文名称〗：Phosphotungstic acid hydrate；Tungstophosphoric acid hydrate；Dodecatungstophosphoric acid hydrate

石蜡包埋组织 DNAout    抗干扰 Taq DNA 聚合酶
DNA 电泳分子量标准 (50-500 bp)    AMV cDNA *链合成试剂盒
DNA 电泳分子量标准 (100-600 bp)    一步式 RT-PCR Mix 
DNA 电泳分子量标准 200-1500 bp)    Bst DNA 聚合酶，全长
DNA 电泳分子量标准 (100-200 bp)    9° Nm DNA 聚合酶
DNA 电泳分子量标准 (200-5000 bp)    Therminator DNA 聚合酶
DNA 电泳分子量标准 (250-1500 bp)    Bsu DNA 聚合酶，大片段
DNA 电泳分子量标准 (100-1500 bp)    Therminator γ DNA 聚合酶
DNA 电泳分子量标准 (100-5000 bp)    T7 DNA 聚合酶 ( 未修饰 )
DNA 电泳分子量标准 (300-10000 bp)    Poly(U) 聚合酶
粪便 DNAout    Taq DNA 连接酶
粪便 DNAout    T4 RNA 连接酶 1
分子量标准 (