AMV cDNA *链合成试剂盒30 次原理
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AMV cDNA *链合成试剂盒30 次原理

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具体成交价以合同协议为准
2017-01-19 14:53:02
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产品简介

AMV cDNA *链合成试剂盒30 次原理运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

  AMV cDNA *链合成试剂盒30 次原理产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
  AMV cDNA *链合成试剂盒30 次原理产品介绍:

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

〖干燥失重〗:≤1.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:金黄色扇状结晶或结晶性粉末。溶于约40份水,易溶于热水,微溶于甲醇和乙醇。〖熔点〗>300℃。zui大吸收波长372nm。
〖用途〗:生化研究。光度测定钴和钾。检定银、钡、钙、钴、〖铁〗、〖镍〗、〖铅〗。
〖保存〗:RT,避光
双硫腙
〖英文名称〗:Dithizone;Diphenylthiocarbazone;1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone
〖其他名称〗:苯肼硫代羰偶氮苯;打萨宗;二苯磺卡贝松;〖铅〗试剂;苯肼硫碳酰偶氮苯;二苯基硫代卡巴腙;二苯基硫巴腙;二苯硫代偶氮碳酰肼;二苯硫代缩(对称)二氨基脲;二苯基硫卡巴腙;二苯基硫代二氨基脲;2-苯基酰肼苯基二氮烯硫代羧酸;打萨腙;二苯硫代卡贝松;二苯硫卡巴腙
〖CAS号〗:60-10-6
C13H12N4S=256.33
〖级别〗:AR
分光有效〖含量〗:≥75.0%
吸收比率:≥1.55
灵敏度试验:合格
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计):≤0.1%
干燥失量:≤5.0%

柱式动物 RNAout    通用 miRNA 克隆接头
柱式动物 RNAout    m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物
柱式血液 RNAout    m7G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物
柱式植物 RNAout    G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物
柱式凝固血液 DNAout    G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物
柱式土壤 DNAout    3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物
柱式动物 DNAout    RNase 抑制剂 ( 小鼠源 )
RNA 洗脱液    p19siRNA 结合蛋白 
RNA 洗脱液    p19miRNA 检测试剂盒 
一管式病毒 DNA-RNAout    ATP 发光法细胞活力检测试剂盒
柱式粪便 DNAout    ADP/ATP 发光法细胞活力检测试剂盒
    ROX 参考染料

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