cDNA *链合成试剂盒50 次实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
cDNA *链合成试剂盒50 次实验方法按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品介绍：

产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖重金属〗(以Pb计)：≤0.0005%
甲烷溶解试验：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：蓝色结晶性粉末。易被空气氧化，可加入二氧化硫水溶液保护。易溶于四录化碳和氯方，其溶液不稳定，微溶于乙醇，不溶于水。〖熔点〗 168℃(分解)。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)〖铅〗的灵敏试剂，并用作测定钴、铜、汞、〖锌〗和银等。络合指示剂
〖保存〗：RT，避光
姜黄素
〖英文名称〗：Curcumin；1,7-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione；C.I. 75300；C.I. Natural Yellow 3；Diferuloylmethane
〖其他名称〗：克扣明；1,7-双(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮；天然黄3；二阿魏酸甲烷；（E,E）-1，7-双（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1，6-庚二烯-3，5-二酮姜黄素；姜黄色素；川芎内酯B
〖CAS号〗：458-37-7
C21H20O6=368.38
〖级别〗：AR
〖含量〗：≥95.0%
〖熔点〗：182～185℃（2℃间距）
灵敏度试验：合格
乙醇溶解试验：合格

柱式细菌 RNAout    单细胞裂解液 (DNA)
一站式柱式 miRNAout    单细胞裂解液 (RNA)
一步法无内毒素质粒 DNAout    单细胞悬浮液
柱式 DNA PAGE 胶回收试剂盒    胚胎裂解液
柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒    显影定影套装
柱式 RNA 纯化试剂盒    显影粉
DMSO，PCR     定影粉
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)    荧光尺
柱式 OLIGO 回收试剂盒    凋亡 DNAout
RNA  Tris Base( 三羟甲基氨基甲烷 )    DNA 磷酸化试剂盒
RNase-free 水    Taq 酶抗体
RNase-free 水    Taq 酶抗体
非冻型细菌 RNA 保存液    Real-Time PCR 稀释液
非冻型细菌 RNA 保存液