ROX 参考染料200μL原理合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
ROX 参考染料200μL原理按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

ROX 参考染料200μL原理产品介绍：

ROX 参考染料200μL原理产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖其他名称〗：5-二甲氨基-1-萘磺酰氯；丹酰氯；1-二甲氨基萘-5-磺酰氯；5-二甲氨基萘-1-磺酰氯；氯化-1-二甲氨基萘-5-磺酰；5-二甲基氨基-1-萘磺酰氯
〖CAS号〗：605-65-2
C12H12ClNO2S=269.75
〖级别〗：BR
〖含量〗： ≥98.0%
〖熔点〗：72～74℃
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：黄色或橙色结晶。对湿敏感。溶于丙同、吡啶、苯和二氧六环，不溶于水，极缓慢地被水分解。可在氯化钙干燥器中稳定数月。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)酚类和蛋白质、氨基酸的荧光标记。色谱试剂
〖保存〗：-20℃，避光
核固红
〖英文名称〗：Nuclear fast red；Calcin red；Kernechtrot；1-Amino-2,4-dihydroxyanthraquinone-3-sulfonic acid sodium salt ；C.I. 60760
〖其他名称〗：细胞核坚牢红；钙红；核快红；乙二缩双邻氮基酚
〖CAS号〗：6409-77-4
C14H8NNaO7S=357.27

ROX 参考染料200μL原理mRNA 提取试剂盒    柱式葡萄球菌 RNAout
大提柱式动物 RNAout    柱式分枝杆菌 RNAout
大提柱式血液 RNAout    白色念珠菌 RNAout
大提柱式植物 RNAout    柱式白色念珠菌 RNAout
大提柱式真菌 RNAout    LB 平板培养基 无抗
大提柱式细菌 RNAout    LB 平板培养基 (Amp 抗性 )
一站式大提柱式 miRNAout    LB 平板培养基 (Kan 抗性 )
一站式动物 mRNAout    LB 平板培养基 (Tet 抗性 )
IPTG 溶液，200mg/mL    Protein A 磁珠
X-Gal 溶液，20mg/mL    Protein G 磁珠
蛋白酶 K 溶液，10mg/mL    T4 RNA 连接酶 2( 双链 RNA 连接酶 )
大提柱式质粒 DNAout     T4 RNA 连接酶 2( 截短型 )
大提柱式质粒 DNAout     T4 RNA 连接酶 2( 截短型 K227Q)
超杂交液 A（