Real-Time PCR 稀释液1mL实验方法产品介绍：

Real-Time PCR 稀释液1mL实验方法产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

〖级别〗：FMP
分光有效〖含量〗：≥90.0
层析试验：合格
薄层层析试验：合格
干燥失量：≤5.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：微红至深棕色粉末。遇氢氧成浅紫色，在硫酸中为棕色溶液。溶于乙醇和水。zui大吸收波长518nm。有刺激性。文献上也有指本品为中性红(Neutral red)的
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)结缔组织细胞核染色。测定钙的试剂
〖保存〗：RT，避光
8-苯胺-1-萘磺酸
〖英文名称〗：ANSA；1,8-ANS ；8-Anili-naphthalenesulfonic acid；N-Phenyl-1-naphthylamine-8-sulfonic Acid；Phenyl Acid；N-Phenyl peri acid
〖其他名称〗：N-苯基-8-萘胺-1-磺酸；8-苯氨基-1-萘磺酸；8-苯胺基-1-萘磺酸；N-苯基-1-萘胺-8-磺酸；N-苯基周位酸；苯基-1-萘胺-8-磺酸；苯基周位酸
〖CAS号〗：82-76-8
C16H13NO3S=299.34
〖级别〗：BR
纯度：≥98.0%
〖熔点〗：215～217℃
Insolubles in diluted ammonia：≤0.3%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：灰色至暗绿色或色粉末。其钠盐为浅绿色至灰色针状或片状结晶,不溶于水，溶于乙醇
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)1,8-ANS 是一种荧光染料，对蛋白质的疏水表面具有高亲和力。1,8-ANS经历蓝移和荧光强度显着增加后，结合到低极性区域的蛋白质表面。这些属性使1,8 - ANS 非常适合用于测定亲和力的疏水性配体及其相应的结合蛋白，如具有疏水性的游离脂肪酸的脂肪酸结合蛋白(FABPs)
〖保存〗：RT
铋试剂Ⅰ
〖英文名称〗：DMTD ；Bismuththiol Ⅰ；,3,4-Thiadiazole-2,5-dithiol；2,5-Dimercapto-1,3,4-thiadiazole
〖其他名称〗：2,5-二巯基-1,3，4-硫代二氮唑；二硫醇硫代二氮唑；二巯基噻二唑；2,5-二巯基噻二唑；二硫基硫代二唑；2,5-二巯基-1-硫-3,4-二氮茂；1,3,4-噻唑烷-2,5-二硫酮；2,5-二巯基-1,3,4噻二唑
〖CAS号〗：1072-71-5
C2H2N2S3=150.25
〖级别〗：BR
〖含量〗：≥98.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：黄色针状结晶或粉末。易溶于乙迷和碱溶液，微溶于乙醇，不溶于水、氯方和苯。碱性溶液不稳定，久置有硫析出。有刺激性。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)检定铋、铜、〖铅〗、钯和锑。光度测定铋和钯。铋的容量测定
〖保存〗：RT，避光。保质期5年

超杂交液 B（含甲酰胺）    M13mp18DNA
96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )    φX174RF Ⅰ DNA
一步法 96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )    φX174RF Ⅱ DNA
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5    DAPI 干粉
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )    碘化丙啶干粉
96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )    Hoechst33258 干粉
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )    Hoechst33342 干粉
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )    WST-1 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
96 孔板病毒 DNAout( 离心法 )    Furin 蛋白酶
96 孔板病毒 DNAout( 离心法 )    二硫键异构酶，人
96 孔板病毒 RNAout( 离心法 )    超氧化物歧化酶，人
96 孔板病毒 RNAout( 离心法 )    硫氧还蛋白
dITP 溶液，100mM