即用型荧光定量 PCR 试剂盒600 次实验步骤产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
即用型荧光定量 PCR 试剂盒600 次实验步骤产品介绍：

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

钙指示剂
〖英文名称〗：Calconcarboxylic acid；3-Hydroxy-4-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)naphthalene-2-carboxylic acid
〖其他名称〗：钙羧酸指示剂；钙红；钙羧酸钠；钙羧酸；钙试剂羧酸钠；3-羟基-4-[(2-羟基-4-磺基-1-萘基)偶氮]-2-萘羧酸；2-羟基-1-(2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮)-3-萘甲酸；钙试剂羧酸；3-羟基-4-(2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮)萘-2-羧酸；1-(2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮)-2-羟基-3-萘甲酸
〖CAS号〗：3737-95-9
C21H14N2O7S=438.41
〖级别〗：IND
稀氢氧溶液溶解试验：合格
络合试验：合格
滴定试验：合格
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计)：≤0.3%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：棕色至色结晶或褐色粉末。易溶于碱液和氨水，微溶于水。在pH不大于10时呈红色，pH13～14间为浅蓝色，能和钙形成红色螯合物。〖熔点〗300℃。zui大吸收波长 560(366)nm。有刺激性。商品也有制成钠盐的，易溶于水，水溶液和乙醇溶液均不稳定。常与100倍的氯混匀后使用

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