即用型多重 PCR 试剂盒50 次原理产品介绍：

即用型多重 PCR 试剂盒50 次原理产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

C29H20ClN7O11S3=774.16
〖级别〗：试剂级
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：蓝色粉末
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
甲酚红
〖英文名称〗：Cresol Red；o-Cresolsulfonphthalein；4,4'-(3H-2,1-Benzoxathiol-3-ylidene)bis(2-methylphenol) S,S-dioxide
〖其他名称〗：邻甲酚红；邻甲酚磺酰酞；邻甲酚磺酞；邻甲磺酞；邻甲酚磺酜酞
〖CAS号〗：1733-12-6
C21H18O5S=382.43
〖级别〗：IND
pH变色域：6.5（黄）～8.5（紫）
zui大吸收波长λ1(pH 6.5)：432～436 nm
zui大吸收波长λ1(pH 8.5)：571～574 nm
质量吸收系数α1(λ1,pH 6.5,干样)：49.0～67.0L/cm·g

琼脂糖    超杂交液 ( 芯片 )
蛋白酶 K 干粉    超杂交液 ( 原位杂交 )
大提无内毒素质粒 DNAout    脱脂奶粉 ( 杂交 )
大提无内毒素质粒 DNAout    鲱鱼精 DNA 溶液
一站式全血 mRNAout    Red-Taq DNA 聚合酶
酵母化学感受态细胞制备试剂盒    Long-Taq DNA 聚合酶
酵母化学感受态细胞制备试剂盒 ( 含转化液 )    miRNA cDNA *链合成试剂盒
酵母电转感受态细胞制备试剂盒    dATP 溶液，2.5mM
真菌总蛋白质微量提取试剂盒    dTTP 溶液，2.5mM
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )    dGTP 溶液，2.5mM
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )    dCTP 溶液，2.5mM
SDS-PAGE 上样液，5×    dCTP 溶液，100mM
SDS-PAGE 上样液，5×    dITP 溶液，2.5mM
一站式 Tricin