即用型高保真 PCR 试剂盒9mL实验方法
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即用型高保真 PCR 试剂盒9mL实验方法

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具体成交价以合同协议为准
2017-01-19 14:39:28
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产品简介

即用型高保真 PCR 试剂盒9mL实验方法运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

即用型高保真 PCR 试剂盒9mL实验方法产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
即用型高保真 PCR 试剂盒9mL实验方法产品介绍:

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

质量吸收系数α2(λ2,pH 8.5,干样):100.0~132.0L/cm·g
〖干燥失重〗:≤3.0%
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计):≤0.2%
乙醇溶解试验:合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:红棕色结晶性粉末。溶于乙醇、水、稀酸(黄色)和稀碱(紫色)。其0.1%乙醇溶液或0.04%钠盐水溶液用作指示剂
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)酸碱指示剂,pH 7.2(黄)~8.8(紫红); pH 2.0(橙色)~3.0(琥珀色)。
〖保存〗:RT
甲酚红钠盐
〖英文名称〗:Cresol Red sodium salt;o-Cresolsulfonphthalein sodium salt
〖其他名称〗:邻甲酚磺酰酞钠盐;邻甲酚红钠盐
〖CAS号〗:62625-29-0
C21H17NaO5S=404.41
〖级别〗:IND
纯度:≥95.0%

氨基染膜液    两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)
半干法电转液 ( 干粉 )    单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)
印迹膜抗体稀释液    LAMP 扩增阳性对照
Western 印迹膜封膜液 (NC 膜和 PVDF 膜 )     * 
Western 印迹膜洗膜液    鼻腔采样拭子 
一站式蛋白质非变性 PAGE 套装 ( 高 pH)    DNA 样品采样拭子 
一站式蛋白质非变性 PAGE 套装 ( 中 pH)    * A 
一站式蛋白质非变性 PAGE 套装 ( 低 pH)    * B 
Tricine-SDS-PAGE 上样液    百万碱基动物 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 上样液    百万碱基血液 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 阳极电泳液 ( 干粉 )    Southern 血液 DNAout
Tricine-SDS-PAGE 阳极电泳液 ( 干粉 )    FTA 血片 DNAout
 红 ),6×( 非甘油 )

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