核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理
核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理
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核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理

核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理

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2017-01-19 14:36:36
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产品简介

核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
核苷酸类似物法易错 PCR 试剂盒15 次原理产品介绍:

合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

纯度:≥99.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:类白色至黄色粉末。
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)化学发光试剂
〖保存〗:-20℃。保质期2年
1-亚硝基-2-萘酚
〖英文名称〗:1-Nitroso-2-naphthol;α-Nitroso-β-nophthol
〖其他名称〗:α-亚硝基-β-萘酚;钴试剂;1-亚硝基萘酚;1,2-萘醌-1-肟
〖CAS号〗:131-91-9
C10H7NO2=173.17
〖级别〗:AR
纯度:≥96.0%
〖熔点〗:104~108℃
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:棕黄色针状结晶或粉末。易升华。微溶于水,溶于乙醇、苯、乙迷、二硫化碳、苛性碱溶液,化碳、四录化碳等有机溶剂,微溶于冷石油醚。溶液微黄色或棕橙色,与Co3+、Ru3+、ZrO2+、Fe2+等生成红或蓝色得微溶于水的配合物,可为甲烷、四录化碳萃取
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)用作光度法测定钴、钯、锆的显色剂。用作富集Cr3+、Co2+、Fe2+、UO 的共沉淀剂,也用作Ag+、Cd2+、Co2+、Cu2+、Ni2+、Th4+等离子的萃取剂,称量法测定钴的沉淀剂。
〖保存〗:RT
1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚
〖英文名称〗:PAN;1-(2-Pyridylazo)-2-naphthol
〖其他名称〗:α-吡啶偶氮-β-萘酚;过氧硝酸己盐酯;2-吡啶偶氮-2-萘酚;1-(2-联氮吡啶)-2-萘酚
〖CAS号〗:85-85-8

杂交袋    DNA 上样液 ( 蓝 ),6×( 非甘油 )
JM109 化学感受态细胞    超螺旋 DNA 分子量标准
SURE 化学感受态细胞    PAGE 胶长加样枪头
低载量 PCR 片段纯化试剂盒    水饱和正丁醇
低载量 PCR 片段纯化试剂盒    预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (19:1)
高载量 PCR 片段纯化试剂盒    预混型丙烯酰胺 - 甲叉双丙烯干粉 (29:1)
高载量 PCR 片段纯化试剂盒    冷冻型血液 RNA 保存液
RNA  Oligo(dT) 纤维素    柱式 G+细菌 RNAout
MgCl2溶液,25mM,PCR     柱式病毒 RNA-DNA 双提试剂盒
硅胶膜 DNA 离心吸附柱 ( 大提 )    凝胶法 miRNA 分离试剂盒 
*消化液 ( 含 EDTA)    一站式磁珠法植物 mRNAout
*消化液 ( 无 EDTA)    一站式磁珠法全血 mRNA 提取试剂盒
青*溶液    一站式磁珠法真菌 mRNA 提取试剂盒
 HEPES( 羟乙基乙硫磺酸 )

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