DNA Shuffling 试剂盒10 次实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
DNA Shuffling 试剂盒10 次实验方法按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品介绍：

产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

C15H11N3O=249.27
〖级别〗：AR
分光有效〖含量〗：≥90.0%
〖熔点〗：138～142℃(2℃)
铜络合物摩尔吸收系数，ε/(L/cm·mol)：≥2.1×104
〖灼烧残渣〗(以〖硫酸盐〗计)：≤0.1%
乙醇溶解试验：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：橙红色无定形粉末。溶于甲醇、乙醇、苯、乙迷、氯方和热稀碱液，不溶于水。溶液在pH12以上时，呈粉红色，在弱酸中呈橙红色，在浓硫酸中呈紫色。其金属络合物呈粉红色或红色。zui大吸收波长 462nm。有刺激性
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)络合指示剂，滴定铋、镉、铜、镓、铟、镧系元素、〖镍〗、〖铅〗、钍、驼(III)、铀、〖锌〗。痕量金属的沉淀富集。光度测定钴、铜、三价〖铁〗、镓、汞、铟、铱、锰、〖镍〗、〖铅〗、钯、铑、钌、锑、钛、铀、钒、〖锌〗、锆和镧系元素
〖保存〗：RT，避光
4-（2-吡啶偶氮）*
〖英文名称〗：PAR；4-(2-Pyridylazo)resorcinol
〖其他名称〗：吡啶-(2-偶氮-4)*；4-(2-吡啶偶氮)-1,3-苯二酚；4-2-吡啶偶氮*
〖CAS号〗：1141-59-9
C11H9N3O2=215.21
〖级别〗：AR
〖含量〗：≥95.0%

亲和硅烷     Oligo(dT) 再生溶液
红细胞裂解液 B 型 ( 流式细胞分析用 )     *标记的 Oligo(dT)
Tricine 干粉，电泳     柱式血清血浆 RNAout
TBE 电泳液 ,10×    柱式血清血浆 DNAout
TBE 电泳液 ,10×    气相 RNase 清除剂
柱式尿液 DNAout    DNase I 溶液
非冻型尿液 DNA 保存液    免 DNA 提取 PCR 试剂盒
非冻型尿液 DNA 保存液    即用型热启动 PCR 试剂盒
一站式 DNA 尿素 -PAGE 电泳套装    接头 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)
柱式 DNA 清除剂    接头 DNA(EcoR I-Sma I)
蛋白胶微量回收试剂盒    接头 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)
蛋白胶中量回收试剂盒    接头 DNA(Sal I-Sma I)
柱式植物 RNAout 2.0    接头 DNA(pSma I)
Ⅲ    DNA