即用型易错 PCR 试剂盒100 次实验步骤产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

即用型易错 PCR 试剂盒100 次实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

灵敏性试验：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：棕色或橘红色粉末，微溶于水，溶于醇和醚，易溶于酸性及碱性水溶液，其钠盐易溶于水。与金属离子形成水溶性或不溶于水的配合物，配合物多为红色或红紫色。〖熔点〗188℃
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)络合滴定指示剂，测定铋、镉、铜、镓、汞、铟、锰、〖镍〗、〖铅〗、钍、驼(III)、〖锌〗、镧系元素离子等。光度测定铋、钴、铜、镓、铟、镧系元素、锰、钼、铌、〖镍〗、镎、锇、〖铅〗、钯、铑、钌、钪、钽、驼(III)、钛、铀和钒
〖保存〗：RT，避光
4-（2-吡啶偶氮）*钠盐
〖英文名称〗：PAR sodium salt；4-(2-Pyridylazo)resorcinol monosodium salt
〖其他名称〗：吡啶-(2-偶氮-4)*一钠盐；4-(2-吡啶偶氮)*单钠盐一水物
〖CAS号〗：16593-81-0
C11H8N3NaO2·H2O=255.21
〖级别〗：IND
纯度：≥95.0%
Maximum UV absorption：411 nm
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：橙棕色至棕色结晶粉末。易溶于水和乙醇，水溶液呈黄色，不溶于乙迷。zui大吸收波长 411nm。有刺激性。

DNA  75% 乙醇    EcoR I-Not I-BamH I 接头
lambda(λ)DNA    白细胞裂解液
lambda(λ)DNA    酵母 DNAout
lambda(λ)DNA    柱式酵母 DNAout
即用型荧光定量 PCR 试剂盒    玻璃珠法柱式酵母 DNAout
即用型荧光定量 PCR 试剂盒    96 孔板质粒 DNAout( 真空法 )
Tth DNA 聚合酶    Cy3-dCTP 溶液，10mM
AMV 逆转录酶    Cy5-dCTP 溶液，10mM
电泳甘油    Sephadex G50 介质
XL1-Blue 化学感受态细胞    DAB 法杂交试剂盒
BL21(DE3) 化学感受态细胞    TMB 法杂交试剂盒
 (3)φX174 DNA/Hae