可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制剂0.3mL实验步骤合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制剂0.3mL实验步骤按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品介绍：
产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖保存〗：RT
固红B
〖英文名称〗：Fast red B salt；1-Amino-2-methoxy-4-nitrobenzene diazotated 1,5-naphthalenedisulfonate salt；2-Methoxy-4-nitrobenzenediazonium 1,5-naphthalenedisulfonate salt
〖其他名称〗：标准重氮色盐玫瑰红；B红盐；固红B盐
〖CAS号〗：49735-71-9
C7H6N3O3·C10H7O6S2=467.43
〖级别〗：BR
纯度：≥90.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：鲜黄色粉末。商品常是稳定的1,5-萘二磺酸盐。有刺激性
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)组织化学中用于重氮化偶合反应,测定磷酸酶和脂酶
〖保存〗：RT，避光
5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯
〖英文名称〗：CFSE；5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester
〖其他名称〗：5(6)-羧基二醋酸乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯；二乙酸-N-琥珀酰亚胺酯羰基荧光素
〖CAS号〗：150347-59-4
C29H19=557.46
〖级别〗：BR
〖含量〗：≥90%(HPLC)
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：粉末。溶于DMSO、DMF
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)适用于荧光性试验

硫酸*    古细菌 + 真细菌种属鉴定 PCR Mix 3
多粘菌素 B 硫酸盐    草杆菌 PCR Mix 4
硫酸*    高 GC 革氏阳性细菌 PCR Mix 5
亲和素    链霉菌 PCR Mix 6
*    Poly r(A)
植酸钠    Poly(I).Poly(C)
*红    Percoll
脱落酸    Ficoll-Paque 介质
*钠    Deaza dGTP
碘代乙酰胺    双脱氧 dNTP 套装
亚铁 ( 三水合 )    dNTP 和引物清除剂
2-(N- *啉 ) 乙磺酸    鲁米诺
牛胆酸钠    AMPPD
碘硝基四唑紫嘌呤    山羊抗小鼠 IgG(H+L), 碱性磷酸酶标记
固蓝 RR 盐    山羊抗兔 IgG(Fc)，碱性磷酸酶标记
新生霉素    山羊抗人 IgG(H+L)，碱性磷酸酶标记
L- *