双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理
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双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理

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具体成交价以合同协议为准
2017-01-19 14:15:14
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产品简介

双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

详细介绍

双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理产品介绍:
双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
噻唑橙
〖英文名称〗:Thiazole Orange;1-Methyl-4-[(3-methyl-2(3H)-benzothiazolylidene)methyl]quinolinium p-tosylate
〖CAS号〗:107091-89-4
C26H24N2O3S2=476.61
〖级别〗:BR
有效分光〖含量〗:~90%
消光系数Extinction Coefficient:≥65000 (波长Wavelength501-513nm)
消光系数Extinction Coefficient:≥10000 (波长Wavelength286-290nm)
消光系数Extinction Coefficient:≥28000 (波长Wavelength235-239nm)
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:橙色或红橙色粉末,〖熔点〗270℃
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
2-氨基吖啶酮
〖英文名称〗:AMAC;2-Aminoacridone;2-Ami0H-acridin-9-one
〖CAS号〗:27918-14-5
C13H10N2O=210.23

双脱氧 dNTP 套装40uL×4原理四氧嘧啶    Therminator II DNA 聚合酶
次甲基绿    96 孔板病毒 DNAout( 真空法 )
庚烷磺酸钠    一步法 96 孔板质粒 DNAout( 真空法 )
固绿    一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 真空法)
金胺 O    细胞计数液 (Vi-CELL 仪 )
乙酰丁香酮    Protein A+G 琼脂糖
聚乙烯聚吡咯烷酮    即用型 GFP 标签蛋白裂解液
聚乙二醇 12000    动态显色法内毒素定量试剂盒
聚乙二醇 20000    动态浊度法内毒素定量试剂盒
聚乙二醇 3350    WGA 糖蛋白分离试剂盒
聚乙二醇 4000    大提柱式酵母 DNAout
聚乙二醇 6000    小牛胸腺 DNA 溶液
聚乙二醇 8000    DNA 探针变性液
聚乙二醇溶液    MMLV 逆转录酶 (H-)
硫酸*    耐热型 MMLV 逆转录酶 (H-)
碘化丙啶苯    96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 真空法 )
活性蓝 19    PCR Mix 染料
马来酸钠    DAB 法*杂交试剂盒
硼氢化氰钠    TMB 法*杂交试剂盒
乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺    ATP 溶液,2.5mM
-2- 苯基吲哚

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