Deaza dGTP0.4mL实验方法合成建文库用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
Deaza dGTP0.4mL实验方法按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。

产品介绍：
产品及特点:

本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

〖级别〗：BR
〖含量〗：≥98%(HPLC)
荧光性：λex 420 nm; λem 538 nm in 0.1 M Tris pH 8.0
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：粉末。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)适合荧光性研究
〖保存〗：RT
金黄三羧酸
〖英文名称〗：ATA；Aurintricarboxylic acid
〖其他名称〗：金精三羧酸
〖CAS号〗：4431-00-9
C22H14O9=422.34
〖级别〗：BR
〖含量〗：≥85%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：深红色至褐色粉末。溶于1 M NH4OH：10mg/ml
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)铝试剂的中间体
〖保存〗：RT，保质期6年
硫黄素T

多聚 -L- 赖氨酸 (15-30 万 )    UTP 溶液，2.5mM
多聚 -L- 赖氨酸 (3-7 万 )    GTP 溶液，2.5mM
多聚 -L- 赖氨酸 (7-15 万 )    CTP 溶液，2.5mM
D- 果糖 -6- 磷酸二钠    预稀释 BGG 蛋白标准品
*抑制剂    咪唑溶液，2M
Nα- 苯甲酰*乙酯    Zenker 固定液
二甲苯青    Helly 固定液
叠氮钠    Carnoy 固定液
聚蔗糖 400    Karnovsky 固定液
L- * ( 氧化型 )    10nt 随机引物，0.5μg/μL
L-(+) 乳酸锂盐    Tth 核酸内切酶 IV
α- 氰基 -4- 羟基肉桂酸    一站式* TUNEL 试剂盒 (FITC/POD)
天狼猩红    DNase I 干粉
健那绿 B    Oligo(dT) 纤维素
4’,6- 二脒基