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上海市所在地
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
产品名称 | 豹猫皮肤成纤维样细胞;LCS5使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 豹猫皮肤成纤维样细胞;LCS5使用说明书
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系来源于一雌性豹猫的皮肤组织。2004年由*昆明细胞库建立。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:2传代;3-4天一次
传代情况 P3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 B类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
羟基磷灰石 Hydroxyapatite 1306-06-5
羟基萘酚蓝 HYDROXYNAPHTHOL BLUE 63451-35-4
羟基烷氧基葡聚糖 NA
羟乙基-L-纤维素 Hydroxyethyl Cellulose 9004-62-0
羟乙基磺酸钠 Sodium isethionate 1562-00-1
羟吲哚,98+% Oxindole 59-48-3
*酶浓缩液 NA
氢碘酸;碘氢酸 Hydroiodic acid 10034-85-2
氢化奎宁定 HYDROQUINIDINE 1435-55-8人Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫试剂盒 Human SDC1 ELISA Kit
人SWI/SNF相关, 基质关联,肌动蛋白依赖染色质调控因,亚家族c,成员1(SMARCC1)免疫试剂盒 Human SMARCC1 ELISA Kit
人STEAP家族成员4(Steap4)免疫试剂盒 Human Steap4 ELISA Kit
人STEAP家族成员1(Steap1)免疫试剂盒 human Steap1 ELISA Kit
人Stathmin 1(STMN1)免疫试剂盒 Human STMN1 ELISA Kit
人STAT3蛋白抑制分(PIAS3)免疫试剂盒 Human PIAS3 ELISA Kit
人Spondin-2 免疫试剂盒 Human Spondin-2 ELISA Kit
人SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SMOC2)免疫试剂盒 Human SMOC2 ELISA Kit
人SPARC相关模块化钙结合蛋白1(SMOC1)免疫试剂盒 Human SMOC1 ELISA Kit
人SMAD3 免疫试剂盒 Human SMAD3 ELISA Kit