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上海所在地
产品名称 | 兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF培养
形态特性 成纤维样
生长特性 贴壁生长
特征特性 北京眼科研究所建系细胞。
培养条件 F12: Ham's F12 Nutrient Mixture 5%FBS
传代方法 1:3传代;2~3天1次。
传代情况 P8
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
示蛋白胨 NA
蛋白胨 Proteose peptone 91079-38-8
眎胨3号 NA
叔丁胺¤ tert-Butylamine 75-64-9
叔丁醇钾 PotassiuM tert-butoxide 865-47-4
叔丁基二苯基氯硅烷 tert-Butylchlorodiphenylsilane 58479-61-1
叔丁基二甲基氯硅烷(2-8℃) tert-Butyldimethylsilyl chloride 18162-48-6
叔丁基异氰酸酯 tert-Butylisocyanate 1609-86-5
叔十二硫醇 tert-dodecylthiol 25103-58-6
曙红 Y 醇溶 Solvent Red 43 15086-94-9人3-葡萄糖苷酸孕二醇(PdG)免疫试剂盒 Human Pregnanediol-3-glucuronide,PdG ELISA kit
人Ⅱ型前胶原羧基端肽(PⅡCP)免疫试剂盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅱ procollagen,PⅡCP ELISA Kit
人Ⅱ型前胶原N端前肽(PⅡNP)免疫试剂盒 Human procollagen Ⅱ N-terminal peptide,PⅡNP ELISA Kit
人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫试剂盒 Human type Ⅱ collagen helical peptide,HELIX-ⅡELISA Kit
人Ⅱ型胶原交联C端肽(CTX-Ⅱ)免疫试剂盒 Human Cross Linked C-opeptide Of Type II Collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型胶原代谢产物C2C(C2C)免疫试剂盒 Human Collagen Type II Cleavage,C2C ELISA Kit
人Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫试剂盒 Human C-opeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)免疫试剂盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)免疫试剂盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit
人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)免疫试剂盒 Human 28S ribosome RNP antibody,28S rRNP ELISA Kit
人26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(PSMD11)免疫试剂盒 Human PSMD11 ELISA Kit
人25羟基*3(25 HVD3)免疫试剂盒 Human 25-hydroxy vitamin D3,25 HVD3 ELISA Kit