【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  家猫肾细胞；CATK1培养
形态特性   上皮样，多角形
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞来源于一雄性家猫的肾组织。2000年由*昆明细胞库建立。 
培养条件   M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
传代方法   1：2传代；3-4天一次
传代情况  P4
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  荧光法（-）
STR   -
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
牛肉膏    BOTTLE BEEF EXTRAC    68990-09-0
牛血红蛋白(+4℃)    HEMOGLOBIN    9008-02-0
壬基酚聚氧乙烯醚    Arkopal N 100    9016-45-9
偶氮二羧酸二乙酯97％    Diethyl azodicarboxylate    1972-28-7
偶氮二（阴凉）（*）    2,2'-Azobis(2-methylpropionitrile)    78-67-1
偶氮磺III钠盐    SULFONAZO III    68504-35-8
偶氮氯磷I    ;    85561-96-2
偶氮氯磷III    CHLOROPHOSPHONAZO III    1914-99-4
偶氮胭脂红B（老批号）    AZOCARMINE B    25360-72-9
帕拉派克 PS    PORAPAK P-S (100-120 MESH ASTM) FOR GC    63993-71-5
帕拉派克 R    PORAPAK R (100-120 MESH ASTM) FOR GC    12673-67-5人α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)免疫试剂盒    Human α-glucosidase ELISA Kit
人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫试剂盒    Human α-SMA ELISA Kit
人α-内*肽(α-EP)免疫试剂盒    Human α-Endomorphin,α-EP ELISA Kit
人α肌动蛋白(α Actin)免疫试剂盒    Human Alpha-Actin,α Actin ELISA Kit
人α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)免疫试剂盒    Human α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH ELISA Kit
人α*S转移酶(α-GST)免疫试剂盒    Human α-GST ELISA Kit
人α干扰素(IFN-α)免疫试剂盒    Human Interferon α,IFN-α ELISA Kit
人α-辅肌动蛋白4(ACTN-4)免疫试剂盒    Human ACTN-4 ELISA Kit
人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)免疫试剂盒    Human ACTN-3 ELISA Kit