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果糖(FT)检测试剂盒可见分光光度法说明书
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-B501
规格:50T/48S
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:5mg/mL 标准液 1mL×1 支,4℃保存;
试剂二:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 10mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂四:粉剂 0.5g×1 瓶,常温保存。
产品说明:果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。
操作步骤:
一、果糖提取:
称取约 0.1g 样本,常温研碎;加入 1mL 提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于80℃水浴锅中 10min(盖紧,以防止水分散失),振荡 3~5 次,冷却后,4000g,常温离心 10min,取上清;加入少量(约 2mg)试剂四,80℃脱色 30min(盖紧,以防止水分散失);再加入 1mL 提取液,4000g,常温离心 10min,取上清液测定。
果糖(FT)检测试剂盒二、测定操作表(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
1、 可见分光光度计预热30min 以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 |
|
| 100 |
试剂一 |
| 100 |
|
蒸馏水 | 100 |
|
|
试剂二 | 700 | 700 | 700 |
试剂三 | 200 | 200 | 200 |
混匀,80℃水浴内反应 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却后测定 480nm 处光吸收值,记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管,并计算△A 测定=A 测定管-A 空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。
果糖(FT)检测试剂盒果糖含量计算:
1、按蛋白浓度计算
果糖含量(mg/mg prot)= C 标×△A 测定÷△A 标准×V 样总÷(Cpr×V 样总)
= 5×△A 测定÷△A 标准÷Cpr
2、按样本鲜重计算
果糖含量(mg/g 鲜重)= C 标×△A 测定÷△A 标准×V 样总÷W
=10× △A 测定÷△A 标准÷W
C 标:标准品浓度,5mg/mL;W:样品鲜重,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V 样总:提取液体积,2mL。
果糖(FT)检测试剂盒注:如果测定管的OD 值大于 0.6,请用提取液稀释样品。