人14-3-3蛋白Elisa KitHuman 14-3-3 Protein ELISA Kit
14-3-3是一个丰富的广泛表达的蛋白家族，是一个可以自发聚集成二聚体的多功能蛋白质。初在脑脊液提取物中检测出14-3-3蛋白的相对高丰度。14-3-3广泛分布于从植物到哺乳动物等所有真核生物中，哺乳动物有7种异构体，大部分以同源或异源二聚体形式存在于细胞质中，与多种细胞蛋白结合并相互作用。14-3-3以稳定的同源/异源二聚体形式聚集在一起，能同时结合两个配体。所有14-3-3的三级结构都极其相似，哺乳动物14-3-3蛋白是由两个单体连接形成的杯状二聚体结构，每个单体由9个α螺旋（αA～αI）组成，反向平行排列成L型结构，彼此间被一短环间隔，其中αC和αD的氨基酸序列长（30～34个氨基酸残基），它们跨越整个单体并连接形成一个卷曲的螺旋结构。二聚体界面由一个单体的αA与另一个单体的αC和αD构成，其中含有疏水性残基和极性残基，形成高度保守的兼性沟槽。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为单克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体，检测相人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为多克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体，经*（biotin）标记。样品和*标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂准备：
1. 人14-3-3蛋白Elisa Kit使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。​

样本处理及要求：
1. 人14-3-3蛋白Elisa Kit血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
公司采用人14-3-3蛋白Elisa Kit的全是进口原材料研，发灵敏性高，高效性，*抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA试剂盒产品齐全，质量可靠。
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