蛋白快速银染试剂盒的应用

　　蛋白快速银染试剂盒是一种快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。

　　其优点还在于：

　　1、操作简单、快速;

　　2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质朴检测;

　　3、目的条带清晰;

　　4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit相比，前者操作速度更快，但检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

　　蛋白快速银染试剂盒操作步骤：

　　1.准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。

　　2.水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。

　　3.固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。

　　4.洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗2次，每次5min。

　　5.水洗：去离子水清洗凝胶2次，每次5min。

　　6.增敏：配制银染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h内用完。室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min，立即用去离子水清洗凝胶2次，每次1min。

　　7.银染：配制银染工作液，即取Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml去离子水中，混匀，即得1×Silver Stain，一般应2h内用完。取凝胶入1×Silver Stain，在摇床上室温摇动10～20min。

　　8.水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶2次，每次30s，摇动速度在60～70rpm。总的水洗时间应控制在1.5min内。

　　9.显影：配制银染显影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Developer，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室温孵育2～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2～3min，亦可延长至5min以上，如果显影效果不佳，可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。

　　10.迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上摇动10min，以终止显色反应。(配制银染终止液，即取Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到90ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Stop Buffer，一般应24h内用完。)

　　11.保存：弃终止液，加入去离子水50ml，摇床上摇动2～5min，弃液。短期保存于新鲜去离子水，长期保存可以制备干胶。

　　蛋白快速银染试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒