Β-半乳糖苷酶染色试剂盒的应用

　　Β-半乳糖苷酶染色试剂盒是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。

　　绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

　　Β-半乳糖苷酶

　　本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测。贝博β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色培养细胞中的衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。

　　Β-半乳糖苷酶染色试剂盒操作步骤

　　染色工作液的配制方法如下：

　　试剂C：β-半乳糖苷酶染色液A 12.5ul

　　试剂D：β-半乳糖苷酶染色液B 12.5ul

　　试剂E：β-半乳糖苷酶染色液C 925ul

　　试剂B：X-Gal溶液50ul

　　注意：

　　1.使用聚丙烯容器，不能使用聚苯乙烯容器配置染色工作液。

　　2.对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法：聚丙烯容器可以高温高压灭菌;而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌，一旦高温高压就会严重变形。

　　(一)Β-半乳糖苷酶染色试剂盒贴壁细胞染色：

　　1、对于6孔板中培养的贴壁细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml试剂A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。

　　【注】：对于其他类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。

　　2、吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次，每次3min。

　　3、吸除PBS或HBSS，每孔加入1ml染色工作液。以充分盖住样品为宜。

　　4、37℃孵育2h至过夜，直至样品显蓝色，一般2-3h会有蓝色出现，12-16h后达到显色。可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。以充分盖住样品为宜。

　　【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

　　5、普通光学显微镜观察。

　　如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2mlPBS，4℃可保存数天;

　　或者加上封片液封片后，4℃可保存较长时间。

　　(二)Β-半乳糖苷酶染色试剂盒悬浮细胞染色：

　　1、离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml试剂A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。

　　【注】：固定时可以在摇床上缓慢摇动，以免细胞结团。

　　2、低速离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次，每次3min。

　　3.低速离心、吸除PBS或HBSS，每管加入0.5~1ml染色工作液。

　　4.37℃孵育2h至过夜。直至样品显蓝色，一般2-3h会有蓝色出现，12-16h后达到

　　显色。可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。以充分盖住样品为宜。

　　【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

　　5.取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜观察。

　　如不能及时观察计数，可以离心去除染色工作液，加入1mlPBS，4℃可保存数天;

　　如离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可保存较长时间。

　　Β-半乳糖苷酶染色试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒