糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用)

　　产品及特点本产品为在 PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂，所需时间仅需不到两小时，而其他的染色方法需 要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。它有如下特点：

　　1. 一站式，包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白，用户不要单独配制 所需成分，简单快捷。

　　2. 通过共价修饰方式检测糖基，不检测蛋白部分。

　　3. 灵敏度一般可以达到微克级别，但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关。

　　4. 可以用于 SDS-PAGE 和 2D 电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电 泳的检测(但背景较高)，还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

　　5. 本产品足够染色 10 张 mini-PAGE 胶或 20 张 8×8cm 的蛋白印迹纤维 素膜。

　　糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用)

　　规格及成分 成份 编号 大纸盒包装

　　氧化试剂 131075a 2.5 g(棕色管)

　　糖蛋白染色试剂 131075b 250 mL(棕色瓶)

　　还原试剂 131075c 1.25 g

　　阳性对照(辣根过氧化物酶) 131075d 1 mg(棕色管)

　　阴性对照 131075e 1 mg(棕色管)

　　250mL 塑料瓶(空) - 2 个

　　使用手册 131075sc 1 份

　　糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用)运输及保存 常温运输和保存，但阳性对照和阴性对照干粉需要 4℃或更低温度长期保存， 有效期一年，但糖蛋白染色试剂的有效期只有半年(从出厂时间开始计算)。

　　自备试剂 甲醇、冰醋酸、超纯水、1×SDS-PAGE 上样缓冲液等

　　使用方法 实验前

　　使用方法 实验前准备

　　1. 配制 3%醋酸溶液：将 30 mL 自备的冰醋酸与 970 mL 超纯水混匀，室 温保存备用。

　　2. 配制 50%甲醇溶液：将 250 mL 甲醇与 250 mL 超纯水混匀，室温保存 备用。

　　3. 配制氧化试剂溶液：将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液(第 1 步配制)， 充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。

　　4. 配制还原试剂溶液：将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超纯水，充分混匀溶解后得 到还原试剂溶液，室温保存备用。

　　5. 配制阳性对照(辣根过氧化物酶)溶液：向装有 1 mg 辣根过氧化物酶固 体的棕色管中加入 1 mL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液(自备)，所得辣 根过氧化物酶溶液的浓度即为 1mg/mL，然后分装成 100uL/管共 10 管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来说，每条泳道加 10 μL 的阳性对照溶液即可。

　　6. 配制阴性对照溶液：向装有 1 mg 抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上样缓冲液(自备)，所得大豆 抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/mL，然后分装成 100uL/管共 10 管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来说，每个泳道加 10 μL 的阴性对照溶液即可。

　　7. 样品稀释：用 SDS-PAGE 上样缓冲液将样品浓度稀释为 1mg/mL， SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为 1×。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来 说，每个泳道加 10μL 的样品。 凝胶染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)

　　8. 取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶，加入到装有 100mL 50%甲醇溶液的器 皿中，浸泡 30 分钟后，倒出甲醇溶液。

　　9. 用 100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡 10 分钟。

　　10. 将胶块转移到装有 25mL 氧化试剂的器皿中，轻轻振荡 15 分钟。

　　11. 用 100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块 3 次，每次轻轻振荡 5 分钟。

　　12. 将胶块转移到装有 25mL 糖蛋白染色试剂的器皿中，轻轻振荡 15 分钟。 (注：若染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。)

　　13. 将胶块转移到装有 25mL 还原试剂的器皿中，轻轻振荡 5 分钟。

　　14. 用 3%醋酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品 红条带。胶块保存在 3%醋酸溶液中。

　　硝化纤维素膜染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)

　　1. 用 20mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡 10 分钟。

　　2. 将膜转移到 10mL 的氧化试剂中，轻轻振荡 15 分钟。

　　3. 用 10mL 3%醋酸溶液洗涤膜 3 次，每次轻轻振荡 5 分钟。

　　4. 将膜转移到 10mL 的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡 15 分钟。(注：若染 色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解 晶体。)

　　5. 将膜转移到 10 mL 还原试剂中，轻轻振荡 5 分钟。

　　6. 用 3%醋酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红 条带。膜可保存在 3%醋酸溶液中。

　　7. 检测后如果没有条带，可以用转膜后的 PAGE 胶进行检测，因为糖蛋白 (尤其是高度糖基化的蛋白)转膜效果比较差。

　　糖蛋白染色试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒