美国NovaBios黄热病病毒核酸PCR试剂（YFV-IgG）

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

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黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黄热病检测试剂盒

美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

美国NovaBios黄热病病毒核酸PCR试剂（YFV-IgG）

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

美国NovaBios

2015年，约有800万美国居民前往42个具有地方性黄热病病毒传播的国家（1）（数据输入，智能输出未发表数据，2016）。黄热病病毒可以由未经免疫的旅行者出口返回病毒不流行的国家。在1970 - 2013年期间记录了至少10个未免疫化的美国和欧洲旅客的黄热病报告（1）。zui近，在2006年爆发期间，黄热病病毒从安哥拉出口到三个国家，导致当地在刚果民主共和国传播（4）。安哥拉疫情从2015年到2017年造成965例确诊病例（4例）。巴西持续爆发，于2016年12月至2017年4月25日（7）发现了681例黄热病。
在美国，只有一种黄热病疫苗被许可使用（YF-VAX; Sanofi Pasteur，Swiftwater，PA，2017）;每年分发约50万剂疫苗接种军民旅客。大约三分之二的这些剂量分布在约4000个民用临床点（Sanofi Pasteur，未发表的数据，2017年）。
目前的YF-VAX供应枯竭始于2015年11月（8）。赛诺菲巴斯德正在将YF-VAX生产从一个较旧的设备转移到2018年开放的新设备，但是制造业并发症导致了大量剂量的损黄热病。作为回应，赛诺菲巴斯德在评估期权时制定了YF-VAX订购限制以扩大现有供应。 2016年春季，赛诺菲巴斯德宣布CDC将在今年晚些时候*消黄热病YF-VAX。赛诺菲巴斯德于2016年底成功生产额外的YF-VAX剂量;这种额外的供应延迟了到2017年中期的预期*消耗，但仍然不足以满足旧设施*关闭与新YF-VAX疫苗生产设施2018年开放之间的期望需求。
关于维持美国黄热病疫苗供应的担忧，伴随着安哥拉开始的大型黄热病爆发，导致CDC，赛诺菲巴斯德，FDA和美国国防部在2016年春季进行了讨论。尽管部分黄热病疫苗讨论了剂量，它被认为是基于有限功效数据的不可行的选择。赛诺菲巴斯德提交了美国进口和民用Stamaril的eIND申请，Stamaril是法国赛诺菲巴斯德公司生产的黄热病疫苗，未经美国许可;国防部提交了自己的eIND申请。 Stamaril使用与YF-VAX相同的疫苗接头17D-204，具有相当的安全性和有效性（9）。自1986年以来，Stamaril已在约70个国家获得许可和分销。赛诺菲巴斯德法国制造了用于黄热病爆发反应的多剂量小瓶和单剂量小瓶，用于为在美国以外居住的旅客接种疫苗。赛诺菲巴斯德项目将根据eIND申请将Stamaril单剂量小瓶进口到美国不会大大影响使用的Stamaril供应。

美国NovaBios

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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In 2015, about 8 million US residents traveled to 42 countries with localized yellow fever (1) (data entry, smart output unpublished data, 2016). The yellow fever virus can be returned by unneeded travelers to countries where the virus is not popular. During the 1970- 2013 period, at least 10 non-immunized reports of yellow fever in US and European travelers were recorded (1). Recently, during the outbreak of 2006, yellow fever virus from Angola to three countries, leading to the local spread in the Democratic Republic of the Congo (4). Angola epidemic from 2015 to 2017 caused 965 cases of confirmed cases (4 cases). Brazil continued outbreak, in December 2016 to April 25, 2017 (7) found 681 cases of yellow fever.
In the United States, only one yellow fever vaccine is licensed for use (YF-VAX; Sanofi Pasteur, Swiftwater, PA, 2017); about 500,000 doses of vaccine are sold each year. About two-thirds of these doses are distributed at about 4,000 civilian clinical points (Sanofi Pasteur, unpublished data, 2017).
The current supply of YF-VAX began in November 2015 (8). Sanofi Pasteur is moving YF-VAX production from an older device to new equipment opened in 2018, but manufacturing complications have resulted in large doses of loss of yellow fever. In response, Sanofi Pasteur developed YF-VAX order restrictions to expand the existing supply when evaluating options. In the spring of 2016, Sanofi Pasteur announced that the CDC will be compley yellowing YF-VAX later this year. Sanofi Pasteur succeeded in producing additional YF-VAX doses at the end of 2016; this additional supply was delayed by the expected full consumption in mid-2017 but still insufficient to meet the permanent closure of old facilities with new YF-VAX vaccine production Facilities required for opening between 2018.
Concerns about the maintenance of the US yellow fever vaccine supply, along with the outbreak of large yellow fever in Angola, led to CDC, Sanofi Pasteur, FDA and the US Department of Defense in the spring of 2016 were discussed. Although partial yellow fever vaccines discuss dosages, it is considered an infeasible choice based on limited efficacy data. Sanofi Pasteur submitted the US import and civilian Stamaril eIND application, Stamaril is the French company Sanofi Pasteur produced yellow fever vaccine, without the US permission; the Ministry of Defense submitted its own eIND application. Stamaril uses the same vaccine linker 17D-204 as YF-VAX, with considerable safety and efficacy (9). Since 1986, Stamaril has been licensed and distributed in about 70 countries around the world. Sanofi Pasteur France has created multi-dose vials and single-dose vials for global fever of yellow fever to vaccinate international travelers living outside the United States. The Sanofi Pasteur project will be based on the eIND application to import Stamaril single-dose vials into the United States without significantly affecting the global use of Stamaril supply.