黄曲霉毒素B1检测卡的实验步骤
时间:2022-04-13 阅读:1009
1、仪器:均质器 、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)。
2、微量移液器:单道20µl-200µl,100µl-1000µl。
3、试剂:甲醇,正己烷。
样本准备:
1、样本处理前须知:实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。
2、配液:配液1:样本提取液 70%甲醇,即V甲醇:V去离子水=7:3。
3、样本前处理步骤:
3.1 谷物、饲料
1)称取2g粉碎样本于离心管中,再根据不同的检出限要求按下表加入样本提取液
检测下限 | 10ppb | 20ppb | 40ppb | 100ppb |
样本提取液 | 2ml | 4ml | 8ml | 20ml |
振荡5分钟,室温4000转/分离心5分钟。
2)取0.1ml上清,加入0.4ml去离子水,混匀备用。
3.2谷物、饲料(须吹干)
若要求检测下限为5ppb时,可按如下操作:
1)称取2g粉碎样本于离心管中,加入4ml样本提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心5分钟;
2)取1ml上层液体在50-60℃条件下用氮气或空气吹干;
3)先加入0.25ml 70%甲醇溶解剩下的残留物,剧烈震荡2分钟;再加入1ml去离子水,混匀备用。(注意:这一步甲醇与水的加液顺序不能颠倒)
稀释倍数:2.5倍 检测下限:5ppb
3.3粮油(菜油、麻油、色拉油、花生油等)
1)称取2g样本于离心管中,再根据不同的检出限要求按下表加入样本提取液
检测下限 | 10ppb | 20ppb | 40ppb | 100ppb |
样本提取液 | 2ml | 4ml | 8ml | 20ml |
然后加入8ml正己烷,振荡5分钟,室温4000转/分离心5分钟。
2)去除上层液体,取0.1ml下层液体加入0.4ml去离子水,混匀备用。
实验步骤:
1、 撕开检测卡铝箔包装袋,取出检测卡,放于平整、洁净的台面上。
2 、用配套吸管吸取已准备好的样本液体,缓慢、逐滴的(应避免泡沫产生)滴加4-5滴(约150ul)到加样孔(S)内。
3 、室温下放置5-8分钟判断结果,超过30分钟的结果无效。
结果判断:
1.阴性:在观察孔内,只有对照线区(C)出现一条紫红色线。
2.阳性:在观察孔内,检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线。抗体滴度越高,检测线(T)颜色越深。
3.失效:在观察孔内,对照线区(C)不出现紫红色线。(注: 去离子水、自来水、生理盐水不能作为阴性对照。)