美国NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

黄热病毒IgM检测试剂

黄热病毒IgG检测试剂

黄热病ELISA检测试剂

黄热病快速检测试剂

黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

美国NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

美国NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

实验室及其他检查
1.一般常规和生化检查
外周血白细胞总数正常或升高，但在本病早期中性粒细胞数常减少。血小板计数正常或减少。血清胆红素、ALT和AST升高，死亡病例更为明显。有黄疸的病例凝血酶原时间及部分凝血活酶时间延长。尿蛋白增多、血清尿素及肌酐升高。
2.病毒分离
采取病初3～4天内血标本接种小白鼠脑内或细胞培养可分离出病毒并用血清学方法进行鉴定。
3.血清学检查
可作血凝抑制试验、补体结合试验或中和试验检测特异性抗体，急性期与恢复期双份血清标本4倍以上增高可以诊断本病。目前多采用抗体捕获酶免疫试验检测黄热病病毒IgM抗体，在感染后一周即呈阳性，有助于早期诊断，早期亦可用抗原捕获试验检测病毒抗原。
4.反转录/聚合酶链反应（RT/PCR）
检测黄热病毒RNA有很强的特异性。有报告血清中病毒RNA较活病毒更为稳定，在27℃常温下能保存相当长时间，优于病毒分离法。
5.其他辅助检查
心电图可见PR及QT间期延长及ST-T波异常。
诊断
对于典型病例黄热病的诊断不难，而对于散发的、早期或轻型病例不易确诊，需借助于实验室检查。
鉴别诊断
在黄热病的诊断过程中应注意：与流行性出血热、钩端螺旋体病、登革热、病毒性肝炎、恶性疟疾及药物中毒性肝炎等进行鉴别。
治疗
至今尚无*疗法。
1.一般治疗
黄热病的治疗应卧床休息直至*恢复，应住在无蚊虫的屋内，尤其在病儿发热期间黄热病毒血症应使用蚊帐。给予流质或半流质饮食，频繁呕吐者可禁食、给予静脉补液，注意水、电解质和酸碱平衡。
2.对症治疗
高热时黄热病的治疗宜采用物理降温为主，禁用阿司匹林退热，因可诱发或加重出血。频繁呕吐可口服或肌注胃复安。有继发细菌感染或并发疟疾者给予合适的抗生素或抗疟药。心肌损害者可试用肾上腺皮质激素。对重症病例应严密观察病情变化，如发生休克、急性肾功能衰竭，消化道出血等即予以相应处理。

美国NovaBios Yellow fever virus IgM(YFV-IgM)ELISA Kit

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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Laboratory and other inspections
1. General routine and biochemical tests
Peripheral white blood cells in the normal or elevated, but in early childhood the number of neutrophils often reduced. Plaet counts are normal or reduced. Serum bilirubin, ALT and AST increased, more serious cases of death. The time of prothrombin time and partial thromboplastin prolongation in patients with jaundice. Increased urinary protein, serum urea and creatinine increased.
2. virus isolation
To take the first 3 to 4 days of the disease blood samples inoculated with the mouse brain or cell culture can be isolated from the virus and serological methods for identification.
3. serological examination
Can be used for hemagglutination inhibition test, complement test or neutralization test to detect specific antibodies, acute phase and convalescence double serum samples more than 4 times higher can diagnose the disease. At present, the anti-virus immunoassay test is used to detect the yellow fever virus IgM antibody, which is positive once a week after infection, which is helpful for early diagnosis. Antigen capture test can also be used to detect virus antigens.
4. Reverse transcription / polymerase chain reaction (RT / PCR)
Detection of yellow fever virus RNA has a strong specificity. It has been reported that viral RNA in serum is more stable than live virus and can be stored at 27 ℃ for a long time at room temperature, which is superior to virus isolation method.
5. Other auxiliary checks
ECG can be seen PR and QT interval extension and ST-T wave anomalies.
diagnosis
For the diagnosis of typical cases of yellow fever is not difficult, and for the distribution of early or light cases are not easy to diagnose, need to rely on laboratory tests.
Differential diagnosis
In the diagnosis of yellow fever should pay attention to: and epidemic hemorrhagic fever, leptospirosis, dengue fever, viral hepatitis, falciparum malaria and drug toxicity of hepatitis and other identification.
treatment
There is no special therapy yet.
General treatment
Treatment of yellow fever should be rested until fully restored, should live in the house without mosquitoes, especially in the sick children during the fever of yellow fever should use mosquito nets. Given fluid or semi-liquid diet, frequent vomiting can be fasting, given intravenous fluid, pay attention to water, electrolyte and acid-base balance.
2. symptomatic treatment
High fever when the treatment of yellow fever should be the main use of physical cooling, disabling aspirin fever, can induce or increase bleeding. Frequent vomiting can be given orally or intramuscularly. Secondary antibiotics or antimalarials are given to secondary bacterial infections or malaria. Myocardial damage can try adrenal cortex hormones. For severe cases should be closely observed changes in the condition, such as shock, acute renal failure, gastrointestinal bleeding, etc. should be dealt with accordingly.