MF2339-1000UL 大肠杆菌化学感受态细胞表达分析
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上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
详细信息
Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签：
Rosetta-gami 2(DE3) ；Rosetta-gami B(DE3)；BL21(DE3)；TunerTM；Origami；Rosetta；
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
MF2339-1000UL | Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 396 |
MF2339-5000UL | Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell | 50×100μl | 1696 |
菌株描述
Rosetta-gami 2菌株融合了Rosetta 2和Origami 2两大菌株的关键特征，不仅增强细胞质中二硫键的形成，而且提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。
→ pRARE2赋予其Rosetta 2菌的特征，补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子（AUA， AGG， AGA，CUA，CCC，GGA和CGG）对应的tRNA，位于一共存的氯霉su抗性质粒上，由天然启动子启动tRNA，提高了外源基因的表达水平。
→ gor522::Tn10 trxB赋予其Origami 2菌的特征，含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘太还原酶（glutathione reductase, gor）基因，明显改善细胞质内二硫键的形成，增强蛋白的可溶性。
DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。
Rosetta-gami 2(DE3)菌株具有氯霉su，链霉su和四环素抗性。兼容于具氨苄或卡那霉su抗性的载体。
Rosetta-gami 2(DE3)菌株基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
产品描述
本品是大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
组分名 | 货号（规格） | ||
MF2339-1000UL | MF2339-5000UL | ||
MF2339-A | Rosetta-gami 2(DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2339-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞，插入冰内8min内加入目的DNA，不可在冰上放置过长，否则转化效率会降低。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最小
6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
7） 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度、IPTG浓度（0.1~2mM）都需进行优化。
8） Rosetta-gami 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉su，以防质粒丢失。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。
2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含34 µg/ml氯霉su和所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉su二钠盐 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉su | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 力福平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
大肠杆菌化学感受态细胞表达分析
大肠杆菌化学感受态细胞表达分析
