线粒体呼吸链复合体Ⅱ试剂盒
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生产厂家关于莱尔:
合肥莱尔生物科技有限公司办公地址位于安徽省合肥市,国家重要的科研教育基地、现代制造业基地和综合交通枢纽,多年来秉承着“客户至上”的企业精神标准化的质控检验,致力于化学试剂行业内的发展和创新,从而大大提高了产品质量,拥有着优质的产品供应链和专业的销售技术团队,发展迅速,为客户提供优质的产品、良好的技术支持、健全的售后服务。
主营ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基、生物试剂、生化试剂盒研发与销售的高科技企业,涵盖技术研发、技术指导、技术转让、实验外包、课题代做等服务。公司拥有着经验丰富的技术人员,多年来通过不断与众多业内人士的交流、论证,致力于拓展生物化学领域,以高水准的产品为准则回馈广大用户,助跑众多新老客户的科研之路。
线粒体呼吸链复合体Ⅱ试剂盒正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基FAD还原为FADH2,后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q,是呼吸电子传递链的支路。
测定原理:
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
线粒体呼吸链复合体Ⅱ试剂盒试剂组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1.5mL×1 支,-20℃保存;
试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂六:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存;
样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆 600g,4℃离心5min。
3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
4、上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ(此步可选做)。
5、步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于复合体Ⅱ酶活性测定。
线粒体呼吸链复合体Ⅱ试剂盒测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至605nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)工作液的配制:临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂4℃可保存一周;
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、25μL试剂六和200μL工作液,立即混匀,记录605nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。
复合体Ⅱ活力单位的计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=559×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)
÷T=113×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.226×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2.35×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L/ mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
b.使用96孔板测定的计算公式如下:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T
=1118×ΔA÷Cpr
线粒体呼吸链复合体Ⅱ试剂盒此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=226×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.452×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2.35×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×10 4 L
品牌 | 莱尔生物 |
自备仪器 | 分光光度计/酶标仪 |
运输 | 常温/2-8℃ |
保质期 | 三个月 |
规格 | 50T/100T |
注意事项 | 仅限于科学研究 |
订购方式 | 联系客服 |
货期 | 现配,1-3天 |
说明书 | 见下方商品详情 |